ИСТИНА

Исследование роли клеточных белков в репликации вируса иммунодефицита человека первого типа (ВИЧ-1) крайне важно для понимания патогенеза ВИЧ-инфекции, а также для развития стратегии создания новых анти-ВИЧ препаратов – ингибиторов взаимодействия вирусных белков с клеточными партнерами. Такие ингибиторы могут стать альтернативой ингибиторам вирусных ферментов, приводящих к возникновению лекарственно-устойчивых штаммов вируса. Белки SFPQ и NONO обладают высокой степенью структурной гомологии, являются основными компонентами ядерных белково- нуклеиновых комплексов параспеклей и участвуют в ответе на повреждения ДНК, регуляции транскрипции и сплайсинга. Показано их участие в подавлении ВИЧ-инфекции за счет удержания вирусных несплайсированных мРНК в параспеклях. При этом в экспериментах по поиску клеточных партнеров ВИЧ-1 белки SFPQ и NONO были обнаружены в составе предин- теграционного комплекса, что предполагает их участие и в ранних стадиях репликации вируса, однако механизм этого уча- стия не известен. Целью настоящей работы было исследование участия белков SFPQ и NONO в ранних стадиях репликатив- ного цикла ВИЧ-1: обратной транскрипции, интеграции и постинтеграционной репарации. Для этого был использован ре- пликативно-некомпетентный вектор на основе ВИЧ-1, в его составе вирусные гены заменены на ген люциферазы светлячка, и уровень экспрессии люциферазы при трансдукции клеток этим вектором коррелирует с эффективностью ранних этапов жизненного цикла ВИЧ-1. Мы обнаружили, что уровень люминесценции изменяется в ответ на изменение внутриклеточного уровня белков SFPQ и NONO. С помощью ПЦР в реальном времени мы детектировали количество обратно- транскрибированной, интегрированной и репарированной форм вирусной ДНК, и определяли, на какую стадию оказывается эффект. Также установлено, что рекомбинантный SFPQ не связывается с обратной транскриптазой, но взаимодействует с интегразой, при этом для NONO такого взаимодействия не обнаружено. Показано, что в присутствии SFPQ каталитическая активность интегразы снижается. Сравнительный анализ гомологичных структур SFPQ и NONO и исследование связывания серии делеционных мутантов интегразы с SFPQ позволили определить структурные детерминанты взаимодействия этих белков. Работа поддержана грантом РФФИ No 20-04-00437.