ИСТИНА

Белки семейства поли(АДФ-рибоза)-полимераз (ПАРП) активно вовлечены в различные пути репарации повреждений ДНК. В опухолевых клетках ПАРП обеспечивает определенный уровень резистентности клетки к действию химиотерапевтических агентов. В тоже время в терминально дифференцированных соматических клетках ПАРП может выступать в качестве медиатора процессов, ведущих к клеточной гибели в условиях воспаления, ишемии/реперфузии, лекарственной токсичности. В связи с этим ПАРП рассматривается как важная мишень в терапии онкологических, сердечно-сосудистых, воспалительных и других заболеваний. Разработанные в настоящее время синтетические ингибиторы ПАРП, несмотря на свою высокую эффективность, демонстрируют выраженные негативные побочные эффекты. Поэтому в настоящее время особенно актуален поиск более безопасных ингибиторов ПАРП, в частности, среди природных соединений. Одним из таких перспективных ингибиторов является 7-метилгуанин (7-МГ). Способность данного соединения конкурентно ингибировать ПАРП была продемонстрирована методами моделирования и структурного анализа, а также в экспериментах с рекомбинантным белком ПАРП-1 человека. Задачей представленной работы было изучение ПАРП-ингибиторных свойств 7-МГ непосредственно в культивируемых клетках. Исследования проводили на культурах кардиомиобластов крысы Н9с2. Активность ПАРП оценивали по накоплению поли-(АДФ-рибозы) (ПАР) после кратковременной обработки клеток 1 мМ H2O2, приводящей к массированному повреждению ДНК и активации всего клеточного пула ПАРП. Содержание ПАР оценивали после фиксации клеток и иммунофлуоресцентного окрашивания методами флуоресцентной микроскопии и флуорометрии. Проведенные исследования показали, что: 1) прединкубация клеток в присутствие 300 мкМ 7-МГ, приводит к снижению уровня стимулированной активности ПАРП в среднем на 55%; 2) равновесная концентрация 7-МГ в клетке устанавливается не позднее, чем через 30 мин после внесения его в среду; 3) ингибирование ПАРП носит обратимый характер, уже через 10 минут после удаления 7-МГ из среды активность ПАРП в клетке полностью восстанавливается. Оценка влияния 7-МГ на жизнеспособность дифференцированных в миоциты клеток Н9с2 показала, что 120-часовая инкубация клеток Н9с2 в среде с 300 мкМ 7-МГ не приводит к снижению плотности клеточной культуры и накоплению в культуре мертвых клеток. Проведенное исследование показало, что 7-МГ достаточно легко проникает в клетку, обратимо связывается ПАРП, вызывая его дозозависимое ингибирование и не проявляя при этом заметного цитотоксического действия даже при длительной аппликации.