ИСТИНА

1) Продолжено исследование роли глицил-тРНК синтетазы (GlyRS) в инициации трансляции на РНК полиовируса. В сотрудничестве с профессором Михаэлем Нипманом, получены инфекционные ДНК-клоны, содержащие последовательность для полноразмерного генома РНК полиовируса. В этой последовательности был мутирован участок узнавания глицил-тРНК синтетазой с тем, чтобы выяснить как такая мутация влияет на жизнеспособность вируса. Оказывается ли он полностью нежизнеспособным или же приводит к фенотипу с маленькими бляжками. В ближайшее время такие опыты будут проведены в лаборатории Нипмана. 2) Рибосомный профайлинг для клеток, находящихся в условиях гипоксии и голодания по глюкозе. Эти условия имитируют те, которые наблюдаются при ишемии. Рибосомный профайлинг осуществлен в сотрудничестве с ирландскими коллегами, но собственно сам профайлинг выполнен сотрудником лаборатории Д.Е. Андреевым на линии крысиных клеток PC12. Серьезные изменения в экспрессии генов наблюдались при этих условиях уже через 20 мин, причем изменения в транскрипции наблюдались всего для ~ 100 генов, а изменения в трансляции затрагивали порядка 3000 генов. Они были связаны как с изменениями в скоростях инициации и элонгации синтеза белков, так и в строгости узнавания их инициаторных кодонов. В наибольшей степени изменения затрагивали гены, вовлеченные в окислительное фосфорилирование. Изменения включали трансляцию так называемых upstream reading frames, сайт-специфические паузы в движении рибосом по матрицам, образование альтернативных изоформ с аминокислотными довесками на N-концах, трансляцию двух белковых продуктов с одного сегмента мРНК, но в двух разных рамках считывания. 3) Продолжены исследования по выяснению функции трансляционного фактора DAP5. Осуществлен рибосомный профайлинг клеток HEK293T с нокдауном по этому белку. Нокдаун не приводил в снижению жизнеспособности этих клеток и не влиял заметным образом на их деление, во всяком случае на дистанции в одну-две недели. Это согласуется с существующими в литературе предположениями о том, что необходимость в белке DAP5 возникает при дифференцировке клеток, при развитии или при выходе клеток из стрессового состояния. В результате профайлинга нами обраружено порядка 10 мРНК, трансляция которых достоверно снижается, но не более, чем в 2 раза. Эти мРНК в настоящее время проверяются на требование белка DAP5 с помощью репортерных конструкций.