Рекомбинантный эритропоэтин человека с процессируемыми дополнительными белковыми доменами: очистка белка, синтезированного в гетерологичной системе экспрессии в Escherichia coliстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Информация о цитировании статьи получена из
Web of Science,
Scopus
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 4 января 2018 г.
Аннотация:Синтезом в гетерологичной системе экспрессии в Escherichia coli получены три варианта рекомбинантного
эритропоэтина человека (rhEPO), несущие на Nконцах дополнительные белковые домены: 1) мальтозосвя
зывающий белок (MBP), 2) MBP с шестью остатками гистидина (6His) в Nконцевом положении, 3) stag
(15звенный олигопептид из рибонуклеазы А поджелудочной железы быка) также с 6His на Nконце. Оба
варианта белка, содержащие MBP, характеризовались склонностью к агрегации в неденатурирующих усло
виях, а после специфического отщепления MBP энтерокиназой оказалось невозможным разработать про
цедуру разделения эритропоэтина и отщепленного домена. В случае химерного белка 6HisstagEPO уда
лось разделить продукты протеолиза энтерокиназой с помощью колоночной хроматографии, и был получен
rhEPO без дополнительных белковых доменов. MALDITOFмассспектрометрический анализ показал,
что химерный белок 6HisstagEPO после проведения рефолдинга формирует структуру, близкую к натив
ной, с двумя дисульфидными связями. Как 6HisstagEPO, так и очищенный после протеолитического гид
ролиза rhEPO без дополнительных доменов обладали одинаковой биологической активностью in vitro на
культуре клеток.