|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
ПОЛУЧЕНИЕ ФЕТАЛЬНЫХ ФИБРОБЛАСТОВ КРОЛИКА И КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ КОНСТРУКЦИЕЙ, СОДЕРЖАЩЕЙ ГЕНЫ ЛАКТОФЕРРИНА ЧЕЛОВЕКА, НЕОМИЦИНФОСФОТРАНСФЕРАЗЫ И ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО КРАСНОГО БЕЛКАстатья
- Авторы: Столярова В.Н., Рябых В.П., Езерский В.А., Колоскова Е.М., Кириенко К.В., Лавров В.И., Максименко О.С., Максименко С.В.
- Журнал: Проблемы биологии продуктивных животных
- Номер: 4
- Год издания: 2013
- Первая страница: 5
- Последняя страница: 21
- Аннотация: Исследования направлены на разработку методики получения фибробластов крупного рогатого скота и кролика, генетически трансформированных генно-инженерной конструкцией, содержащей репортёрный ген (с репортёрным геном) красного белка, с целью использования их в качестве источников (источника) кариопластов для получения трансгенных животных на основе технологии клонирования. Получены культуры фетальных фибробластов кролика и крупного рогатого скота, трансформированных конструкцией, включающей структурный ген лактоферрина человека ( hLF) под промотором гена α S 1-казеина крупного рогатого скота, репортёрный ген флуоресцентного красного белка ( RFP ) под цитомегаловирусным промотором (cmv ) и селективный ген неомицинфосфотрансферазы ( Neo ) под промотором вируса sv40 ( α S 1-Cn-hLf-cmvRFP-svNeo). Показано, что кроличьи фетальные фибробласты хуже поддаются трансфекции кальций-фосфатным методом, по сравнению с фибробластами крупного рогатого скота, при времени адсорбции равном 24 ч и времени экспрессии 48 ч. Трансфекцию фетальных фибробластов кролика кальций-фосфатным способом удалось осуществить только при обработке их ДМСО. Фибробласты крупного рогатого скота хорошо трансформировались без применения протекторов; частота трансформации составила 8,6 на 10 5 клеток и эффективность трансформации − 3,5 на 10 5 клеток и 1 мкг ДНК конструкции при использовании 2,4 мкг ДНК конструкции и 7,6 мкг ДНК носителя. Добавление ДНК-носителя к ДНК-конструкции при трансфекции фетальных фибробластов липофектаминовым методом существенно повышало частоту трансфекции фибробластов крупного рогатого скота и не оказывало значительного влияния на частоту трансфекции фибробластов кролика.
- Добавил в систему: Кириенко Константин Владимирович