Изучение протеолиза основного белка миелина при аутоиммунных патологиях ЦНС методом масс-спектрометриитезисы доклада

Работа с тезисами доклада


[1] Изучение протеолиза основного белка миелина при аутоиммунных патологиях ЦНС методом масс-спектрометрии / Е. С. Кузина, А. С. Кононихин, А. А. Белогуров и др. // Тезисы Четвёртой Всероссийской конференции-школы Фундаментальные вопросы масс-спектрометрии и её аналитические применения, 10-14 октября 2010 г., Звенигород. — Российская академия наук, Институт энергетических проблем химической физики РАН, Российский университет дружбы народов, 2010. — С. 107–107. Протеолитическая деградация аутоантигенов имеет важнейшее значение в современной биохимии и иммунологии. Принципиальным вопросом является функциональная роль образовавшихся пептидов при изменении специфичности расщепления в процессе перехода от нормы к патологии. В клетке белки расщепляются до антигенных пептидов под действием ряда протеиназ, а также протеасомы – мультисубъединичного белкового комплекса. Под действием провоспалительных цитокинов в клетке усиливается экспрессия каталитических иммуносубъединиц протеасомы, которые замещают конститутивные субъединицы, формируя каталитический центр иммунопротеасомы. Конститутивная и иммунопротеасома различаются по субстратной специфичности, и поэтому неодинаково осуществляют деградацию антигенных белков. Предметом настоящей работы является сравнительное исследование особенностей деградации одного из основных нейроантигенов, основного белка миелина (ОБМ), протеиназами, активируемыми при развитии патологического демиелинизирующего процесса, и протеасомой, выделенной из различных источников. Для выявления посттрансляционных модификаций основного белка миелина, была проведена обработка данных, полученных методом ESI-FTICR на программном обеспечении Bruker Data Analysis. Обнаружено, что наиболее распространенными посттрансляционными модификациями ОБМ являются: полное ацетилирование N-конца, моно- и диметилирование части остатков аргинина-106, фосфорилирование части остатков треонина-97, окисление части остатков метионина-19 и метионина-166. Продукты деградации ОБМ рядом протеиназ, а также протеасомой из различных источников были проанализированы на тандемном MALDI времяпролетно-времяпролетном масс-спектрометре, оснащенном УФ-лазером. Протеиназы, ассоциированные с рассеянным склерозом – хроническим нейродегенеративным аутоиммунным заболеванием, расщепляют пептидные связи в ОБМ чаще всего в соответствии со своей специфичностью. При этом получается небольшое количество пептидов длиной 10–20 а.о., способных презентироваться на поверхности клетки. Среди протеиназ выделяется кальпаин, генерирующий значительное количество пептидов, которые могут связываться с молекулами МНС II класса. Протеасома, вследствие своей широкой субстратной специфичности, гидролизует ОБМ в большем числе мест, чем любая из протеиназ. Наиболее интенсивно основной белок миелина процессируется под действием протеасомы, выделенной из головного мозга мышей, склонных к развитию аутоиммунного энцефаломиелита, экспериментальной модели рассеянного склероза. Этот факт может свидетельствовать об усиленной презентации иммунодоминантных фрагментов ОБМ в клетках мозга мышей этой линии. Кроме того, в продуктах деградации ОБМ протеасомой из мозга мышей было обнаружено значительное количество пептида ENPVVHFF, который является частью иммунодоминантного фрагмента ОБМ. Был проведен количественный анализ содержания этого пептида в продуктах гидролиза с применением изотопно меченого аналога ENPVVHFF* (F*=13C9H915NO), синтезированного химически. Выявлено, что при действии протеасомы из мозга мышей линии BALB/c этого пептида образуется в 4 раза меньше, чем при действии протеасомы из мозга мышей линии SJL, предрасположенных к развитию аутоиммунных патологий, и в 8 раз меньше, чем при действии протеасомы из мозга мышей линии SJL, больных аутоиммунным энцефаломиелитом. Этот факт указывает на возможную связь между протеолитической активностью иммунопротеасомы и развитием данного заболевания.

Публикация в формате сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл скрыть