|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Индуцированные глутаматом и ишемией изменения ионного гомеостаза в нейрональной культуре и коре головного мозга мышей, экспрессирующих Cа2+-сенсор GCaMP6fстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАКСтатья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
- Авторы: Кислухина Е.Н., Лизунова Н.В., Лисина О.Ю., Шарипов Р.Р., Красильникова И.А., Бакаева З.В., Пинелис В.Г., Сурин А.М.
- Журнал: Патологическая физиология и экспериментальная терапия
- Том: 67
- Номер: 1
- Год издания: 2023
- Издательство: Гениус Медиа
- Местоположение издательства: М.
- Первая страница: 5
- Последняя страница: 20
- DOI: 10.25557/0031-2991.2023.01.5-20
- Аннотация: Актуальность. При исследованиях внутриклеточного сигналинга и межнейрональной передачи сигнала в мозге в норме и при патологии все большее применение находят трансгенные животные, экспрессирующие в нейронах флуоресцентный Са2+-сенсор. Вместе с тем, пока недостаточно исследовано, насколько изменения кальциевого гомеостаза в интактном мозге соотносятся с гораздо более подробно изученными изменениями этого важнейшего параметра в нейроглиальных культурах, служащих модельными системами живого мозга. Целью работы было на модели ишемического инсульта выяснить в какой степени изменения внутриклеточной концентрации Са2+ ([Ca2+]) в мозге трансгенной мыши, измеренные с помощью флуоресцентного белкового сенсора GCaMP6f, соотносятся с изменениями [Ca2+] в первичных нейроглиальных культурах из кортекса этих животных. Методы. Методом широкопольной оптической нейровизуализации (ШОН) измерены изменения концентрации свободного Са2+ в цитозоле нейронов ([Ca2+]c) головного мозга мышей. Измерения проводили перед и после фотоиндуцированного инсульта в сенсомоторной зоне коры. Изменения [Ca2+]c отслеживали по флуоресценции GCaMP6f, экспрессируемого в нейронах кортекса. На первичных нейроглиальных культурах из коры головного мозга мышей той же линии проверено влияние эксайтотоксических доз глутамата (Glu) на [Ca2+]c и на изменения средней концентрации свободного Са2+ в цитои нуклеоплазме ([Ca2+]i). Измерения [Ca2+]i выполнены методом флуоресцентной микроскопии с использованием синтетических Са2+- индикаторов Fura-2 и Fura-FF. В культивируемых нейронах дополнительно к измерениям кальциевого гомеостаза выполнены измерения внутриклеточного рН (pHi), митохондриального потенциала (ΔΨm) и эндогенной флуоресценции NADH. Результаты. Фотоиндуцированная ишемия вызывает сильный рост [Ca2+]c в зоне облучения ~1,1 мм2 (n=9). В течение суток область высокой [Ca2+]c расширяется до ~6 мм2, но к 7-м сут практически возвращается к размерам необратимого повреждения. В нейроглиальных культурах из коры головного мозга мышей этой же линии кинетика изменений [Ca2+]c, индуцированных Glu, напоминает кинетику [Ca2+]i, однако [Ca2+]c имеет значительно меньшую амплитуду при развитии отсроченной кальциевой дисрегуляции (ОКД). Сопоставление изменений [Ca2+] и pHi показывает, что различия могут быть обусловлены тушением флуоресценции GCaMP6f при закислении цитозоля в результате эксайтотоксического действия Glu. Заключение. Сопоставление сигналов экспрессируемого нейронами Са2+-сенсора GCaMP6f в мозге и синтетических Са2+-индикаторов в первичных нейроглиальных культурах, полученных из животных той же линии, показывает, что феномен ОКД, впервые обнаруженный в культурах, вероятно, реализуется и в нейронах целого мозга при инсульте. Вместе с тем, необходимо учитывать, что относительные изменения [Ca2+]c на разных стадиях развития ишемического повреждения и последующего восстановления мозга после фотоиндуцированного инсульта, могут быть искажены за счет влияния pHi на флуоресценцию белкового сенсора.
- Добавил в систему: Лизунова Наталья Владимировна