Инженерия активного центра формиатдегидрогеназы из Staphylococcus aureus: введение в структуру дополнительной петли и остатков гистидина

Юрченко, Т.С.; Логинова, А.А.; Сергеев, Е.П.; Пометун, Е.В.; Тишков, В.И.; Савин, С.С.; Пометун, А.А.

Авторы: Юрченко Т.С., Логинова А.А., Сергеев Е.П., Пометун Е.В., Тишков В.И., Савин С.С., Пометун А.А.
Журнал: Вестник Московского университета. Серия 2: Химия
Том: 64
Номер: 2
Год издания: 2023
Издательство: Издательский дом МГУ
Местоположение издательства: Москва
Первая страница: 163
Последняя страница: 177
DOI: 10.55959/MSU0579-9384-2-2023-64-2-163-177
Аннотация: NAD+-зависимая формиатдегидрогеназа (КФ 1.2.1.2, FDH) из патогенных бактерий Staphylococcus aureus (SauFDH) значительно отличается от других FDH как по первичной структуре, так и по каталитическим свойствам. Отличительной особенностью SauFDH является самая высокая (примерно в 2,5-3 раза) удельная активность по сравнению с другими формиатдегидрогеназами. При этом, SauFDH обладает высокими значениями констант Михаэлиса по обоим субстратам. На основании анализа трехмерных структур и выравнивания аминокислотных последовательностей были выбраны замены, перспективные с точки зрения изменения каталитических параметров. Замена I220H привела к увеличению KMNAD+; значение kcat не изменилось. При замене Т250Н наблюдается увеличение KMNAD+, kcat снижается с 20 до 13 с-1. Замена K368H привела к незначительному увеличению KMNAD+, kcat снизилась с 20 с-1 до 6 с-1. Введение дополнительных вставок TGA и AGA в α-спираль на С-конец фермента привело к увеличению KMNAD+ и KMHCOO-. Больший эффект наблюдался для KMNAD+ - разница составила более чем в 10 раз. Для мутантных SauFDH со вставками kcat значительно снижается до 4 с-1. Аналогичные результаты наблюдаются для мутантов с многоточечными заменами. Таким образом, было показано, что С-концевая последовательность играет важную роль в катализе SauFDH.
Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных

Инженерия активного центра формиатдегидрогеназы из Staphylococcus aureus: введение в структуру дополнительной петли и остатков гистидинастатья

Прикрепленные файлы