Теломерные и интерстициальные повторы (TTAGGG)n в клетках сирийского хомячкастатьяТезисы
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 21 августа 2017 г.
Аннотация:Повторы (TTAGGG)n в клетках млекопитающих и человека находятся не только на концах хромосом (ТП), но также и в интерстициальных сайтах (ИТП). С использованием FISH с теломерной PNA пробой на метафазных хромосомах сирийского хомячка оценен относительный размер ТП и ИТП. Наиболее значительные по размеру ИТП располагаются в перицентромерных районах хромосом 2, 4, 14, 20 и Х. Незначительные по размеру ИТП обнаруживаются в остальных метацентрических хромосомах за исключением хромосомы 21. С помощью инвертированного DAPI-бэндинга высокого разрешения уточнена структура перицентромерных районов хромосом, в которых обнаруживаются большие блоки ИТП. Идиограммы указанных хромосом отличались от идиограмм, созданных на основе G-бэндинга (Li et al.,1982), главным образом в перицентромерных областях. В разных хромосомах сигналы FISH на ИТП охватывали от 1 до 4 хромосомных бэндов, причем располагались как в темных, так и светлых бэндах, что может быть связано с присутствием повторяющейся ДНК другого типа.
Расположение ТП и ИТП в интерфазных ядрах исследовалось с помощью FISH или после трансфекции клеток плазмидой, экспрессирующей TRF1, белок комплекса шелтерин, слитый с GFP. Для определения стадий клеточного цикла использовали иммунофлуоресцентную окраску на пролиферативный маркер Ki-67 и включение EdU в качестве маркера S-фазы. Описаны характерные картины окраски антителами к Ki-67 для разных стадий цикла клеток сирийского хомячка.
Анализ последовательных серий конфокальных изображений ядер клеток, трансфецированных GFP-TRF1 или после проведения FISH, показал наличие хорошо различимых глазом ассоциаций ТП (2-4 сближенных фокуса) на всех стадиях интерфазы, причем ассоциации фокусов FISH регистрировались чаще, чем ассоциации фокусов TRF1.
Среднее количество всех регистрируемых фокусов GFP-TRF1 на ядро в G0 и G1/ранней S-фазе было меньше, чем среднее количество фокусов FISH на ядро в соответствующих фазах, что может быть связано с увеличением кластеризации ТП за счет сверхэкспрессии TRF1 и образованием тесных ассоциаций ТП, регистрируемых как единые фокусы. Среднее количество фокусов GFP-TRF1 и фокусов FISH на ядро было незначительно увеличено в G1/ранней S-фазе по сравнению с G0, возможно, в связи с тем, что уже в начале S-фазы реплицируется часть ТП.
В живых клетках наблюдалось постоянное стохастическое движение ТП, маркированных GFP-TRF1, которое, однако, в условиях ограниченного времени наблюдения не приводило к образованию стабильных ассоциаций. Наличие на фиксированных клетках «зеленых мостиков» между соседними ТП, отмеченных белком GFP-TRF1, позволяет предположить, что, хотя образование ассоциаций ТП является редким событием в течение интерфазы, оно может быть обратимым.