Разделение природных рибонуклеозид-, трифосфатов и их определение в кислоторастворимой фракции клеток методом анионообменной жидкостной хроматографии высокого разрешениястатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Аннотация:Описана процедура анионообменной ВЭЖХ для определения CTP, UTP, ATP и GTP в кислоторастворимой фракции клеток. Рибонуклеозидтрифосфаты разделяют на LiChrosorb AN изократично с помощью NH4H2PO4-ацетонитрила. Была проанализирована зависимость эффективности разделения от концентраций соли и ацетонитрила и рН, и были выбраны оптимальные условия. Был определен диапазон, в котором наблюдается линейность между количеством рибонуклеозидтрифосфата и площадью соответствующего пика, и были выведены уравнения регрессии. Было обнаружено, что содержание CTP, UTP, ATP и GTP в раковых клетках яичников CaOv в культуре составляет 418 +/- 32, 1122 +/- 21, 9262 +/- 442 и 1036 +/- 49 пмоль/10(6) клеток соответственно. После 2-часовой инкубации с 6-меркаптопурином (10(-4) М) уровень АТФ и ГТФ снижается на 55%, а после 24-часовой инкубации - на 73% для АТФ и 85% для ГТФ. В то же время содержание UTP и CTP снижается на 12-31%