Изучение вклада соматических точечных мутаций в регуляторной области ДНК-метилтрансферазы DNMT3A в развитие онкологических заболеваний крови

Лойко, А.Г.; Громова, Е.С.

Авторы: Лойко А.Г., Громова Е.С.
Сборник: III Объединенный научный форум физиологов, биохимиков и молекулярных биологов (Сочи, Дагомыс, 3–8 октября 2021)
Том: 2
Тезисы
Год издания: 2021
Первая страница: 36
Аннотация: Метилирование ДНК является одним из наиболее интенсивно изучаемых механизмов, отвечающих за эпигенетическиеявления у эукариот. У млекопитающих метилирование осуществляется de novo ДНК-метилтрансферазой DNMT3A по остаткам цитозина в CpG-динуклеотидах. У онкогематологических больных в белке часто обнаруживаются мутации в функционально важных областях, в том числе они затрагивают регуляторный PWWP-домен. Данный домен опосредует взаимодействие белка с нуклеосомой за счет узнавания ДНК и хвоста гистона H3, триметилированного по 36-ому остатку лизина(H3K36me3). В рамках настоящего исследования были изучены детали взаимодействия мутантных вариантов DNMT3A с компонентами нуклеосомы и оценена их метилирующая активность. Были выбраны мутации, наиболее часто встречающиеся вPWWP-домене DNMT3A у онкогематологических больных. С помощью сайт-направленного мутагенеза получены плазмидные конструкции, несущие различные мутантные варианты PWWP-домена (P307R, R326H и W409R) с N-концевым GSTтегом. Также получены конструкции с аналогичными мутациями на основе вектора, несущего ген His6-тагированного полноразмерного DNMT3A с дополнительными заменами Y526A и Y528A для снятия автоингибирования. В качестве модельныхсистем в работе использованы 19-звенный модифицированный пептид pH3K36me3, имитирующий хвост гистона (остатки 26-44) и 30-звенный CpG-содержащий ДНК-субстрат f-DNA. Мутантные варианты изолированного PWWP-домена P307R иW409R подвергались протеолитической деградации в бактериальных клетках, при этом эти же мутации не приводили к внутриклеточной фрагментации полноразмерного белка. Мутации в изолированном PWWP-домене приводили к ухудшению связывания белка с pH3K36me3 и f-DNA. Все мутации, вводимые в PWWP-домен DNMT3A, нарушали активность полноразмерного белка, при этом данные аминокислотные остатки не располагаются в мотивах, непосредственно отвечающих за метилирование. Проведенное исследование позволит установить связь между неправильным функционированием мутантных вариантов DNMT3A и развитием патологий.
Добавил в систему: Лойко Андрей Геннадьевич

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных

Изучение вклада соматических точечных мутаций в регуляторной области ДНК-метилтрансферазы DNMT3A в развитие онкологических заболеваний кровитезисы доклада

Прикрепленные файлы