Аннотация:Одной из ключевых задач при создании ферментных биосенсоров является разработка эффективных подходов к иммобилизации ферментов на сенсорных поверхностях. Именно способ закрепления биомолекулы определяет чувствительность и операционную стабильность биосенсорной системы. Среди перспективных способов иммобилизации ферментов можно выделить модификацию сенсорной поверхности пленками на основе «умных» (стимулчувствительных) полимеров, способных значительно, быстро и обратимо изменять свои свойства при варьировании условий окружающей среды. Особенный интерес представляют собой стимулчувствительные (со)полимерные микрогели, которые обладают высокой емкостью по отношению к связываемым биомолекулам и, будучи высокогидратированными, обеспечивают благоприятное микроокружение для иммобилизованных в них ферментов, способствуя сохранению конформации и биологических функций последних. Данная работа посвящена сравнению двух методов формирования полимер-ферментных покрытий на основе рН- и термочувствительного микрогеля, представляющего собой сшитый сополимер N-изопропилакриламида и диметиламинопропилметакриламида (П(НИПАМ-со-ДМАПМА)), и фермента глюкозооксидазы (ГО), а также их применению для количественного определения глюкозы. Адсорбция П(НИПАМ-со-ДМАПМА) микрогеля и дальнейшее связывание им биомолекул, а также адсорбция предварительно сформированных комплексов П(НИПАМ-со-ДМАПМА)/ГО были исследованы методом пьезоэлектрического микровзвешивания с мониторингом диссипации. Этопозволило выявить оптимальные условия формирования микрогель-ферментных покрытий, прежде всего температуры и рН (при последовательном нанесении компонентов), а также соотношения полимерного и биокомпонентов и температуры. Полученные результаты были использованы для формирования покрытий П(НИПАМ-со-ДМАПМА)/ГО на поверхности планарных графитовых электродов (предварительно модифицированных наночастицами диоксида марганца для придания пероксидчувствительности) и создания на основе таких конструкций амперометрических глюкозных биосенсоров. Метод последовательного нанесения полимерного и биокомпонентов позволил получить сенсорные покрытия с более высокими откликами, в то время как нанесение предварительно сформированных микрогель-ферментных комплексов – сенсорные покрытия с лучшей операционной стабильностью.