Выживаемость нейронов сетчатки в органотипической роллерной культуре заднего сектора глаза крысы: морфологический и функциональный анализтезисы доклада
Аннотация:Среди большого разнообразия методов культивирования сетчатки позвоночных in vitro особого внимания заслуживают т.н. органотипические модели – способы культивирования сетчатки целиком отдельно или в составе заднего сектора глаза. В свою очередь, из них в последнее десятилетие стали популярными методы с использованием роллера.
Целью данной работы являлась подробная качественная и количественная оценка модели кратковременного роллерного органотипического культивирования нейральной сетчатки в составе заднего сектора глаза крысы. Особое внимание отводилось рассмотрению морфофункциональных характеристик ганглиозных клеток сетчатки.
Исследование проводилось путем морфологического изучения гистологических препаратов сетчатки, анализа синтетической активности ганглиозных нейронов с использованием реакции Браше и оценки выживаемости нейронов при помощи метода TUNEL.
Было показано, что сетчатка крысы демонстрирует морфофункциональные свойства, присущие этой ткани в норме, только в пределах первых суток культивирования. Начиная с 24 часов in vitro существенное число клеток ганглиозного слоя претерпевает пикноз ядра и прекращает синтезы РНК. К третьим-четвертым суткам культивирования практически все клетки ганглиозного слоя сетчатки находятся в состоянии олигонуклеосомной деградации хроматина. В ходе культивирования нейральная сетчатка отделяется от подлежащих слоев глаза и претерпевает макроскопические перестройки и изменение цитоархитектоники.
Основной причиной гибели ганглиозных нейронов сетчатки при кратковременном культивировании в течение одних-четырех суток полагается ишемия, а не пересечение аксонов зрительного нерва, поскольку в литературе указывается на иной временной период, необходимый для развития апоптоза в ганглиозном слое при перерезке зрительного нерва (5-7 дней).
Результаты оценки модели культивирования позволяют рекомендовать ее для поиска новых веществ, предохраняющих нейральную сетчатку от гибели при ишемии – для скрининга ретино- и нейропротекторов.