Исследование влияния поли(PR)-пептида на компартментализацию клеточного ядрастатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 27 мая 2021 г.
Аннотация:Наиболее частой причиной развития таких нейродегенеративных заболеваний, как фронтотемпоральная деменция и боковой амиотрофический склероз, является увеличение числа повторов GGGGCC в гене C9orf72, в результате чего в его белковом продукте увеличивается количество повторов пролин-аргинин (PR). Недавно на генетически-модифицированных мышах, экспрессирующих зелёный флуоресцентный белок (GFP), сшитый с фрагментом из пятидесяти PR-повторов, было показано, что накопление в нейронах поли(PR)-пептида приводило к нарушениям в организации гетерохроматина. Для детального изучения причин токсичности поли(PR)-пептида на клеточном уровне на основе вектора pTagGFP-C2 была создана плазмида, кодирующая GFP с дополнительными 50 PR-повторами (далее — поли(PR)- пептид). Полученная плазмида была использована для временной экспрессии поли(PR)-пептида в клетках HeLa и фибробластах человека. С помощью флуоресцентной микроскопии было показано, что поли(PR)-пептид локализуется преимущественно в ядрышке. Окрашивание антителами к ядрышковым белкам B23 и нуклеолину продемонстрировало, что в условиях гиперэкспрессии поли(PR)-пептида они не покидают ядрышко под действием камптотецина, в нормальных условиях вызывающего выход B23 и нуклеолина в нуклеоплазму. С помощью окрашивания антителами к HP1, маркерному белку гетерохроматина, было установлено, что в условиях гиперэкспрессии поли(PR)-пептида гетерохроматин претерпевает некоторые изменения. С целью выяснения детальной картины изменений в структуре хроматина под действием поли(PR)-пептида планируется изучить структуру хроматина с помощью метода Hi-C в клетках HeLa с временной экспрессией поли(PR)-пептида. Планируется создание стабильной клеточной линии, экспрессирующей поли(PR)-пептид, на основе линии HeLa с целью изучения эффектов долговременной гиперэкспрессии поли(PR)-пептида.