Na+-транспортирующая АТФаза плазматической мембраны галотолерантной микроводоросли Tetraselmis (Platymonas) viridis: частичная очистка и электрофоретическая характеристикатезисы доклада

Работа с тезисами доклада


[1] Стриж И. Г., Попова Л. Г., Балнокин Ю. В. Na+-транспортирующая АТФаза плазматической мембраны галотолерантной микроводоросли tetraselmis (platymonas) viridis: частичная очистка и электрофоретическая характеристика // Сборник тезисов докладов 5ой Пущинской конференции молодых ученых. — Пущино, 2001. — С. 181–182. Ранее, в опытах на везикулярных препаратах плазмалеммы (ПМ) морской микроводоросли T. viridis, был исследован транспорт ионов Na+ через ПМ и показано существование Na+-транспортирующей АТФазы. В настоящей работе была проведена частичная очистка Na+-АТФазы с помощью двух ионных детергентов: дезоксихолата (DOC) и лизофосфатидилхолина (LPC) с последующим электрофоретическим разделением полипептидов ПМ. Первая стадия очистки заключалась в удалении периферических и слабосвязанных мембранных белков 0,1% DOC, который солюбилизировал до 70% белков ПМ, оставляя Na+-АТФазу в мембраносвязанной форме. Была предпринята попытка дальнейшей очистки белка путем солюбилизации Na+-АТФазы LPC либо 1% DOC в присутствии глицерина. Однако, фосфорилирование белков с помощью [-32P]ATP с последующим электрофорезом полипептидов в кислом (pH 2,4) ПААГ и радиоавтографией гелей показало, что эти детергенты не солюбилизируют Na+-АТФазу. Образующийся в ходе каталитического цикла фосфоинтермедиат Na+-АТФазы с молекулярной массой 105 kDa регистрировался в осадочной фракции, содержащей мембранные фрагменты. Полученная мембранная фракция была значительно обогащена белком Na+-АТФазы, что позволило визуально идентифицировать соответствующий белок после электрофоретического разделения полипептидов в SDS-ПААГ. Высокая степень разрешения белков после электрофореза и четкая обособленность Na+-АТФазы дают возможность провести дальнейшую очистку белка путем вырезания соответствующей полосы из геля или блота с целью определения аминокислотной последовательности Na+-АТФазы галотолерантной микроводоросли. (Исследование поддержано грантом РФФИ, проект N 98-04-49433).

Публикация в формате сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл скрыть