Определение кинетических констант взаимодействия апоформы простагландин-H-синтазы с гемомтезисы доклада

Работа с тезисами доклада

Прикрепленные файлы


Имя Описание Имя файла Размер Добавлен
1. Полный текст Полный сборник тезисов за 2014 г. sbornik_18_full.pdf 4,9 МБ 17 февраля 2016 [KrivosheyAV]
2. Краткий текст Текст тезисов Krivoshey-P2014_ispravlennoe-2.doc 28,0 КБ 17 февраля 2016 [KrivosheyAV]

[1] Кривошей А. В., Вржещ П. В. Определение кинетических констант взаимодействия апоформы простагландин-h-синтазы с гемом // БИОЛОГИЯ – НАУКА ХХI ВЕКА: 18-я Международная Пущинская школа- конференция молодых ученых (Пущино, 21 - 25 апреля 2014 г.). Сборник тезисов. — Биохимия. — Пущино, 2014. — С. 145–145. Фермент простагландин-H-синтаза (PGHS; К.Ф.1.14.99.1) осуществляет синтез простагландинов из арахидоновой кислоты. Простагландины являются медиаторами, ответственными за важные физиологические процессы: свёртывание крови, репродуктивные функции, работа желудочно-кишечного тракта, реакции иммунного ответа и др. PGHS катализирует две последовательные реакции: циклооксигеназную, в ходе которой арахидоновая кислота окисляется двумя молекулами кислорода и превращается в простагландин G2 (PGG2), и пероксидазную, в результате которой PGG2 преобразуется в PGH2 в присутствии донора электронов. В ходе обеих реакций фермент подвергается необратимой инактивации. Катализ обеих реакций способна проводить только холоформа PGHS (комплекс белка с кофактором гемом). В предыдущих работах определяли только равновесную константу диссоциации комплекса, причём оценивали её значение только косвенным путём, поэтому эти значения расходились на 1-2 порядка. Индивидуальные константы скорости реакций процесса комплексообразования не определялись. В настоящем исследовании кинетику ассоциации и диссоциации холоформы PGHS изучали с использованием апоформы фермента, полученной методом восстановления гемового железа дитионитом натрия в анаэробных условиях и дальнейшего окисления системы кислородом. Концентрацию холоформы PGHS детектировали по скорости циклооксигеназной реакции в различных условиях. Для простейшей модели найдены значения константы скорости присоединения гема к апоферменту (3*105 М-1*сек-1) и константы скорости отщепления гема от холофермента (3,9*10-3 сек-1). Соответственно, равновесная константа диссоциации составляет 1,3*10-8 М при 25oC.

Публикация в формате сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл скрыть