Cинтез в Escherichia coli и характеристика рекомбинантного эритропоэтина человека с дополнительным гепарин-связывающим доменомстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 24 января 2020 г.
Аннотация:Синтезом в клетках Escherichia coli получен рекомбинантный эритропоэтин человека (EPO), несущий на N-конце дополнительный гепарин-связывающий белковый домен (HBD) из костного морфогенетического белка BMP-2. Разработана схема выделения, очистки и рефолдинга, позволяющая получить высокоочищенный белок HBD-EPO со структурой, близкой к нативной, содержащей, как показано с помощью MALDI-TOF-масс-спектрометрического анализа, две дисульфидные связи. Белок обладает биологической in vitro активностью в пролиферативном тесте на линии клеток эритролейкемии человека TF-1, in vivo активностью в тесте по возрастанию количества ретикулоцитов в крови после подкожного инъекционного введения и проявляет местную ангиогенную активность при подкожной имплантации диска из деминерализованного костного матрикса (ДКМ) с иммобилизированным на нем HBD-EPO. Разработан количественный сэндвич-ИФА тест, основанный на использовании кроличьей поликлональной сыворотки и коммерческих моноклональных антител к эритропоэтину, позволяющий определять концентрацию белка HBD-EPO в растворе. Исследование фармакокинетики полученного эритропоэтина показало, что препарат сходен по характеристикам с другими эритропоэтинами, синтезированными в клетках бактерий. HBD-EPO обратимо связывается в физиологических условиях с деминерализованным костным матриксом (ДКМ), часто используемым в качестве остеопластического материала для лечения патологий костной ткани. Данные по связыванию HBD-EPO с ДКМ и проявляемому при его введении в организм местному ангиогенному эффекту позволяют надеяться на успех при использовании HBD-EPO, иммобилизированного на ДКМ, в экспериментах по регенерации костной ткани.