Разработка ингибиторов никующей эндонуклеазы BspD6I на основе синтетических фрагментов ДНКстатья

Статья опубликована в журнале из перечня ВАК

Работа с статьей

Прикрепленные файлы


Имя Описание Имя файла Размер Добавлен
1. Полный текст VestIrkutsk.pdf 478,6 КБ 15 июня 2016 [KubarevaEA]

[1] Разработка ингибиторов никующей эндонуклеазы bspd6i на основе синтетических фрагментов ДНК / Л. А. Абросимова, А. Ю. Мигур, Е. А. Кубарева и др. // Известия ВУЗов. Прикладная химия и биотехнология. — 2015. — Т. 2, № 13. — С. 48–59. Никующие эндонуклеазы (НЭ), узнающие в двутяжевой ДНК специфические последовательности и вносящие разрыв в определенное положение только одной из цепей ДНК, нашли широкое применение в молекулярной биологии и генетической инженерии. НЭ представляют собой перспективные ферменты в качестве молекулярных инструментов для расщепления ДНК вблизи дефектного гена с целью его последующего исправления. Отсутствие неспецифического гидролиза ДНК является ключевым требованием этого метода. Актуальной задачей является направленное регулирование активности НЭ, что предотвратит появление неконтролируемых разрывов в ДНК, приводящих к нежелательным последствиям для клетки. На примере НЭ BspD6I разработан подход, позволяющий выключать и включать фермент в заданный момент времени с помощью внешнего сигнала (изменение температуры) за счет использования термочувствительных аналогов субстрата. Сконструированы 13- и 15-звенные немодифицированные синтетические ДНК-дуплексы, которые блокируют активность фермента при 20 oС. Повышение температуры вызывает диссоциацию дуплексов-ингибиторов и приводит к инициации ферментативного гидролиза протяженной ДНК при ∼ 40–50 oС. Предлагаемый подход может быть использован для оптимизации реакции изотермической амплификации ДНК с вытеснением цепи, а также для модулирования активности химерных нуклеаз, применяемых в генной терапии.

Публикация в формате сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл сохранить в файл скрыть