Результаты этапа: При выполнении предыдущего проекта мы получили список генов человека, обогащенный мишенями транскрипционного фактора ATF4. Это гены, экспрессия которых индуцируется при ингибировании дыхательной цепи митохондрий, но подавляется при последующей активации опухолевого супрессора р53. Полученный список был использован для выявления и идентификации новых генов интегрального анти-стрессового ответа (Integrated Stress Response), находящихся под контролем ATF4.
С помощью эктопической экспрессии уровень ATF4 в клетках HeLa и НСТ116 был увеличен, это привело к значительному повышению уровня мРНК четырех генов (ADM2, HKDC1, KRT16 и FAM129A). Кроме того, мы показали методом ОТ-ПЦР в реальном времени, что экспрессия мРНК генов ADM2, KRT16, FAM129A и HKDC1 индуцируется при ингибировании дыхательной цепи митохондрий и при стрессе эндоплазматического ретикулума, но не при генотоксическом стрессе. При этом специфичная к ATF4 РНК-интерференция подавляла индуцированную экспрессию этих генов. Аналогичное действие оказывал ингибитор интегрального антистрессового ответа ISRIB. Эти данные нам представляются убедительным основанием считать гены ADM2, KRT16, FAM129A и HKDC1 новыми генами интегрального антистрессового ответа и транскрипционными мишенями ATF4.
Были исследованы молекулярные механизмы регуляции экспрессии этих генов. Методом репортерных конструкций и сайт-направленного мутагенеза показано, что ATF4-зависимая регуляция промотора KRT16 опосредована последовательностью TGATGAAAT, расположенной в промоторной области на расстоянии 164 п.о. выше старта трансляции. |