|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Получение и иммунохимическое исследование рекомбинантных антител кандидатов для комплексной профилактики и терапии заболеваний, вызванных вирусом ЭболаНИР
-
- Руководитель НИР: Долгих Д.А.
- Участники НИР: Алиев Т.К., Аргентова В.В., Кирпичников М.П., Панина А.А., Петрова Е.В., Топорова В.А.
- Подразделение: Кафедра биоинженерии
- Срок исполнения: 28 ноября 2014 г. - 31 декабря 2016 г.
- Номер договора (контракта, соглашения): 14.607.21.0196
- Номер ЦИТИС: 114121850104
- Тип: Прикладная
- Приоритетное направление научных исследований: Физико-химические основы биологии и биотехнологии
- ПН России: Науки о жизни
- Направление технологического прорыва России: Медицинские технологии и лекарственные средства
-
Ключевые слова:
вирус эбола, рекомбинантные антитела
-
Описание:
Проект направлен на решение проблемы получения рекомбинантных антител для пассивной иммунотерапии геморрагической лихорадки Эбола. 2. Цель проекта - получение, исследование и отбор моноклональных антител против вирусного гликопротеина для создания на их основе рекомбинантных антител как потенциальных компонентов нового комбинированного терапевтического средства борьбы с лихорадкой Эбола. Основные планируемые результаты проекта Кандидатные моноклональные антитела анти-Эбола должны обладать аффинностью, выраженной значением константы диссоциации комплекса антиген-антитело не более 5 нМ. Первичная структура вариабельных доменов кандидатных моноклональных антител анти-Эбола должна быть подтверждена методами генетического анализа и масс-спектрометрии. Степень очистки экспериментальных образцов рекомбинантных антител анти- Эбола должна быть не менее 95% по данным гель-электрофоретического и хроматографического анализов. Краткая характеристика создаваемой/созданной научной (научно- технической, инновационной) продукции 1. Конечным продуктом являются не менее трех экспериментальных образцов полноразмерных химерных антител анти-Эбола, охарактеризованных в терминах аффинности и кросс-реактивности в отношении белков вируса Эбола. Экспериментальные образцы рекомбинантных антител должны соответствовать аналитическим критериям для проведения в дальнейшем биологических испытаний на животных. 2. Для получения высокоаффинных моноклональных антител проводилась иммунизация мышей конъюгатом рекомбинантного гликопротеина вируса Эбола с белком теплового шока. Для оценки эпитопной специфичности моноклональных антител был применен комплексный подход, основанный на сравнительном анализе различных методов ИФА, иммуноблоттинга и исследования влияния гликозилирования. При получении клеточных линий СНО - продуцентов рекомбинантных антител будет использован уникальный би-промоторный экспрессионный вектор, отбор клонов-продуцентов будет осуществлен с помощью роботизированной флуоресцентной системы клеточного сортинга. 3. Учеными из США и Канады создана композиция терапевтических антител Zmapp для профилактики и лечения геморрагической лихорадки Эбола. Антитела нарабатываются в листьях табака. Набор рекомбинантных антител, разрабатываемый в ходе реализации настоящего проекта, может оказаться альтернативной использования композиции Zmapp или даже превосходить последний по своим биологическим свойствам. 4. Успешный отбор трех высокоаффинных моноклональных антител анти- Эбола позволяет с высокой степенью вероятности о достижении всех заявленных результатов.
-
Планируемые результаты:
1. Планируется получение следующих основных результатов: - в результате иммунизации будет получен и охарактеризован в терминах аффинности и кросс-реактивности представительный набор моноклональных антител против компонентов вирусного капсида; - будут отобраны не менее трех моноклональных антител, специфичных к неперекрывающимся эпитопам вирусного гликопротеина; - будет проведено выделение генов вариабельных доменов кандидатных моноклональных антител анти- Эбола, конструирование генов рекомбинантных антител анти-Эбола и системы их экспрессии; - будут получены клеточные линии СНО - продуценты рекомбинантных антител анти-Эбола; - будут осуществлены биосинтез, выделение и очистка экспериментальных образцов рекомбинантных антител анти-Эбола; - на завершающей стадии проекта будет осуществлена иммунохимическая характеризация рекомбинантных антител анти-Эбола.
- Добавил в систему: Аргентова Виктория Витальевна
Источник финансирования НИР
| ФЦП: Федеральная целевая программа, Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014 - 2020 годы |
Этапы НИР
| # | Сроки | Название |
| 1 | 28 ноября 2014 г.-31 декабря 2014 г. | Получение и иммунохимическое исследование рекомбинантных антител кандидатов для комплексной профилактики и терапии заболеваний, вызванных вирусом Эбола |
| Результаты этапа: Проведена иммунизация мышей линии Balb/c иммуноконъюгатом рекомбинантного белка G вируса Эбола с белком теплового шока HSP65. В результате проведения селекции, скрининга и клонирования новых мышиных гибридом были отобраны 5 гибридом, проведено изотипирование культуральных супернатантов. Для проведения детального иммунохимического анализа и отбора антител-кандидатов были отобраны 3 гибридомы, продуцирующие антитела IgM изотипа, и 2 – IgG изотипа. Осуществлены выделение и очистка всех антител из асцитной жидкости методами аффинной хроматографии на белок G- сефарозе (антитела GPE118 и GPE534 IgG-изотипа) и преципитации эуглобулинов (антитела GPE274, GPE325 и GPE463 IgM-изотипа). Для отбора не менее 3 кандидатных моноклональных антител (МоАт) анти- Эбола исследовано связывание полученных антител с рекомбинантным белком G вируса Эбола в растворе и при его иммобилизации. Для подтверждения специфичности новой панели МоАт также использовали метод иммуноблота, по данным которого все МоАт из новой панели анти- Эбола интенсивно взаимодействуют с полноразмерным белком G. При этом ряд антител взаимодействуют с минорными фрагментами гликопротеина, что подтверждает направленность МоАт к разным эпитопам. Проведено эпитопное картирование новой панели антител анти-Эбола. В результате картирования эпитопов новой панели МоАт анти-Эбола методом сэндвич-ИФА установлены 3 МоАт, которые и являются кандидатными моноклональными антителами для проведения дальнейших исследований. Все кандидатные МоАт анти-Эбола обладают аффинностью, выраженной значением константы диссоциации комплекса антиген-антитело не более 5 нМ, что удовлетворяет требованию ТЗ. | ||
| 2 | 1 января 2015 г.-31 декабря 2015 г. | Получение и иммунохимическое исследование рекомбинантных антител кандидатов для комплексной профилактики и терапии заболеваний, вызванных вирусом Эбола |
| Результаты этапа: 1. Проведена иммунизация мышей линии Balb/c иммуноконъюгатом рекомбинантного белка G вируса Эбола с белком теплового шока HSP65. Получены линии гибридом. 2. В результате проведенных работ по селекции, скринингу и клонированию новых мышиных гибридом были отобраны 5 гибридом, проведено изотипирование культуральных супернатантов. Для проведения детального иммунохимического анализа и отбора антител-кандидатов были отобраны 3 гибридомы, продуцирующие антитела IgM изотипа, и 2 – IgG изотипа. Осуществлены выделение и очистка всех антител из асцитной жидкости методами аффинной хроматографии на белок G- сефарозе (антитела GPE118 и GPE534 IgG-изотипа) и преципитации эуглобулинов (антитела GPE274, GPE325 и GPE463 IgM-изотипа). 3. Показано наличие специфического связывания полученных антител с рекомбинантным белком G вируса Эбола в растворе и при его иммобилизации. По данным иммуноблоттинга все МоАт из новой панели анти-Эбола интенсивно взаимодействуют с полноразмерным белком G. При этом ряд антител взаимодействуют с минорными фрагментами гликопротеина, что подтверждает направленность МоАт к разным эпитопам. 4. В результате картирования эпитопов новой панели МоАт анти-Эбола методом сэндвич-ИФА установлены 3 кандидатных МоАт. Получены кДНК вариабельных доменов кандидатных антител и установлены их нуклеотидные и аминокислотные последовательности. Проведено конструирование экспрессионных векторов для биосинтеза рекомбинантных антител анти-Эбола. | ||
| 3 | 1 января 2016 г.-31 декабря 2016 г. | Получение и иммунохимическое исследование рекомбинантных антител кандидатов для комплексной профилактики и терапии заболеваний, вызванных вирусом Эбола |
| Результаты этапа: 1. Проведена иммунизация мышей линии Balb/c иммуноконъюгатом рекомбинантного белка G вируса Эбола с белком теплового шока HSP65. Получены линии гибридом. 2. В результате проведенных работ по селекции, скринингу и клонированию новых мышиных гибридом были отобраны 5 гибридом, проведено изотипирование культуральных супернатантов. Для проведения детального иммунохимического анализа и отбора антител-кандидатов были отобраны 3 гибридомы, продуцирующие антитела IgM изотипа, и 2 – IgG изотипа. Осуществлены выделение и очистка всех антител из асцитной жидкости методами аффинной хроматографии на белок G-сефарозе (антитела GPE118 и GPE534 IgG-изотипа) и преципитации эуглобулинов (антитела GPE274, GPE325 и GPE463 IgM-изотипа). 3. Показано наличие специфического связывания полученных антител с рекомбинантным белком G вируса Эбола в растворе и при его иммобилизации. По данным иммуноблоттинга все МоАт из новой панели анти-Эбола интенсивно взаимодействуют с полноразмерным белком G. При этом ряд антител взаимодействуют с минорными фрагментами гликопротеина, что подтверждает направленность МоАт к разным эпитопам. 4. В результате картирования эпитопов новой панели МоАт анти-Эбола методом сэндвич-ИФА установлены 3 кандидатных МоАт. Получены кДНК вариабельных доменов кандидатных антител и установлены их нуклеотидные и аминокислотные последовательности. Проведено конструирование экспрессионных векторов для биосинтеза рекомбинантных антител анти-Эбола. 5. Созданы клеточные линии СНО, продуценты рекомбинантных химерных полноразмерных антител GPE118, GPE325 и GPE534, специфичных к гликопротеину вируса Эбола. Разработан лабораторный технологический регламент получения рекомбинантных антител анти-Эбола. Получены экспериментальные образцы рекомбинантных антител GPE118, GPE325, GPE534 анти- Эбола в количестве более 15 мг. 6. Все кандидатные МоАт анти-Эбола обладают аффинностью, выраженной значением константы диссоциации комплекса антиген-антитело не более 5 нМ, что удовлетворяет требованию ТЗ. также 3 кандидатных МоАт направлены к разным эпитопам рекомбинантного гликопротеина вируса Эбола, что является весомой предпосылкой для создания на их основе трехкомпонентного терапевтического средства для нейтрализации вирусных частиц. 7. Учеными из США и Канады создана композиция терапевтических антител Zmapp для профилактики и лечения геморрагической лихорадки Эбола. Антитела нарабатываются в листьях табака. Набор рекомбинантных антител, разрабатываемый в ходе реализации настоящего проекта, может оказаться альтернативной использования композиции Zmapp или даже превосходить последний по своим биологическим свойствам. | ||
Прикрепленные к НИР результаты
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".