ИСТИНА

Проект направлен на решение фундаментальной для биологии и медицины проблемы восстановления сперматогенеза. Задача состояла в изучении способности клеток Сертоли (КС), полученных от взрослых мышей, восстанавливать сперматогенный процесс в семенниках мышей-реципиентов с различными нарушениями развития мужских половых клеток (МПК).

В настоящей работе нами воспроизведены условия культивирования КС, способствующие их переходу к пролиферации. Мы впервые показали, что при экспериментальном крипторхизме КС взрослых мышей переходят к активной пролиферации, приводящей к значительному увеличению их пула. Эти результатыпозволяют с большой долей достоверности предположить, что переход высокодифференцированных КС к делению является обязательным условием реализации их регенеративного потенциала. Для проверки этой гипотезы нами впервые осуществлена трансплантация КС, взятых из крипторхидных семенников, а также культивируемых КС в семенники реципиентов с экспериментально нарушенным сперматогенезом. Полученные результаты показали способность пересаженных клеток заселять базальную мембрану семенных канальцев хозяина, образовывать новые семенные канальцы, а также, в случае КС, взятых из крипторхидных семенников, поддерживать развитие донорских половых клеток. Поведение сперматогенного эпителия после экспериментальных воздействий в эктопических условиях описано впервые. Обнаружена возможность образования канальцеподобных структур при помещении под капсулу почки КС, культивированных в условиях, стимулирующих их к пролиферации. Выполнена серия экспериментов по культивированию in vitro КС, выделенных из семенников мышей разного возраста и после разных воздействий. Нами установлено, что в культуре клеток КС, выделенных из семенников мышей через 14 сут после внутрибрюшинного введения дипина, достоверно увеличивается число пролиферирующих КС, что находится в соответствии с результатами, полученными при исследовании популяции клеток в этой модели in vivo. Культуры КС были подробно охарактеризованы с помощью иммуноцитохимических и принятых в практике мировых исследований подходов интерфазной цитогенетики – отмечено изменение числа хромоцентров и ядрышек. Впервые показано, что воздействие мутагеном стимулирует КС к пролиферации в большей степени, чем повышение температуры, а также, что в условиях in vitro отчетливо выявляется скрытая гетерогенность популяции КС взрослых животных: in vivo, уже с 3-х сут культивирования отчетливо выявляется два «типа» КС, различающихся по морфологии и пролиферативной стратегии. Таким образом, полученные результаты подтверждают справедливость гипотезы о стимуляции КС к делению как обязательном условии реализации их регенеративного потенциала. Впервые в экспериментах с интратестикулярным введением дипина или физиологического раствора показано, что большое число зрелых спермиев оставалось нечувствительными к действию деконденсирующего агента. Этот эффект скорее всего связан с необратимым нарушением функциональной и топологической целостности клеток Сертоли и указывает на возможную ограниченность регенерационного потенциала этих клеток. Наши наблюдения подтверждают точку зрения о том, что количественная оценка химически индуцированных изменений в характере разбухания и декомпактизации ядер зрелых спермиев, может стать весьма полезным инструментом в понимании последствий влияния репродуктивных токсикантов на сперматогенную функцию. Для проведения исследований пространственно-временной организации сперматогенеза в исследованиях последних лет был предложен метод «whole-mount». В процессе выполнения этого проекта мы впервые разработали способ приготовления давленых препаратов целых канальцев, который оказался чрезвычайно удобным для анализа клеточного состава сперматогенного эпителия и характеристики структуры отдельных клеток.