|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Мутационный анализ сигнального каскада TLR4-TNF: в поисках новых регуляторов системы защиты организмаНИР
Mutational analysis of TLR4-TNF signaling pathway: searching for the new regulators of the immune defense system
- Руководитель НИР: Недоспасов С.А.
- Участники НИР: Астраханцева И.В., Губернаторова Е.О., Друцкая М.С., Жданова А.С., Казарян Р.Ш., Киселевский Д.Б., Носенко М.А.
- Подразделение: Кафедра иммунологии
- Срок исполнения: 26 октября 2017 г. - 28 февраля 2021 г.
- Номер договора (контракта, соглашения): 17-00-00325комфи
- Номер ЦИТИС: АААА-А17-117112240031-9
- Тип: Фундаментальная
- Приоритетное направление научных исследований: Физико-химические основы биологии и биотехнологии
- ПН России: Науки о жизни
- Направление технологического прорыва России: Медицинские технологии и лекарственные средства
-
Рубрики ГРНТИ:
- 34.15.33 Молекулярная иммунология
-
Ключевые слова:
tnf, enu-мутагенез, мутационный анализ, tlr4
mutation analysis, tnf, enu-mutagenesis, tlr4 -
Описание:
Несмотря на длительную историю исследования врожденного иммунитета, многие молекулярные аспекты его функционирования остаются не до конца понятными. В рамках Научного проекта будет использована панель линий мутантных мышей, полученных в ННГУ им. Н.И. Лобачевского с помощью полногеномного ENU-индуцированного мутагенеза, для выявления молекулярных регуляторов сигнального каскада TLR4-TNF. Такими регуляторами могут оказаться как белки, так и регуляторные РНК, а также регуляторные последовательности генома. Будет использован оригинальный метод скрининга с помощью острой TNF-зависимой гепатотоксичности, индуцируемой инъекцией липополисахарида и Д-Галактозамина (ЛПС/Д-Гал). Эта модель позволяет быстро обнаружить «защитные» мутации в сигнальном каскаде TLR4-TNF и, таким образом, провести скрининг большого количества мутантов за относительно короткое время. Кроме того, поскольку TNF является важным регулятором лимфогенеза, параллельно будет проводиться анализ нарушений в развитии лимфоидных органов, в частности Пейеровых бляшек. Предварительный скрининг примерно 200 потомков мутантных мышей уже выявил два семейства животных с устойчивостью в модели ЛПС/Д-Гал-индуцируемой гепатотоксичности. В ходе проекта планируется проанализировать еще около 1000 мышей, находящихся в ННГУ, с ожидаемым выходом нескольких (не менее 5) кандидатных мутантов, которые в дальнейшем будут детально изучаться. В частности, из мутантных мышей будут получены первичные культуры макрофагов и гепатоцитов, на которых будет проверена продукция TNF при активации нескольких TLR в ответ на свои лиганды, а также цитотоксичная активность самого TNF. Методы молекулярного картирования и секвенирования должны позволить определить точное положение мутаций, по крайней мере, для половины мутантов.
- Добавил в систему: Киселевский Дмитрий Борисович
Источник финансирования НИР
| грант РФФИ |
Этапы НИР
| # | Сроки | Название |
| 1 | 26 октября 2017 г.-26 октября 2018 г. | Мутационный анализ сигнального каскада TLR4-TNF: в поисках новых регуляторов системы защиты организма |
| Результаты этапа: Целью работы является поиск «иммунологического фенотипа» при полногеномном N-этил-N-нитрозомочевина(ENU)-зависимом мутагенезе в мышах, впервые предпринятом в РФ. Для скрининга нами была выбрана модель липополисахарид/D-галактозамин(ЛПС/D-гал)-зависимого летального септического шока (гепатотоксичности), которая раньше не применялась. В первый год проекта были изучены фенотипические особенности первых трех мутантных линий мышей (М1, М2 и М3, соответственно), полученных в 2017 г. Первичные культуры макрофагов костного мозга мышей линий М1 и М3 характеризовались нормальной продукцией фактора некроза опухоли (TNF) в ответ на ЛПС, и эти линии оказались устойчивы не только к ЛПС/D-гал, но и TNF/D-гал- токсичности. Это означает, что искомые мутации, обеспечивающие устойчивость мышей в двух моделях гепатотоксичности, затрагивают гены, продукты которых участвуют сигнальном каскаде TLR4-TNF после рецептора TNFR1. | ||
| 2 | 6 декабря 2018 г.-3 декабря 2019 г. | Мутационный анализ сигнального каскада TLR4-TNF: в поисках новых регуляторов системы защиты организма |
| Результаты этапа: После полногеномного мутагенеза у мышей были отобраны несколько мутантных линий, которые обладали устойчивостью к гепатотоксичности, вызванной липополисахаридом (ЛПС) и D-галактозамином (D-гал). Медиатором токсичности в этой модели является фактор некроза опухоли (TNF). В одной из линий мутантных мышей, устойчивость к ЛПС-D-гал сочеталась с чувствительностью к TNF-D-гал. В культурах макрофагов, полученных из этой линии мышей, исследовали продукцию TNF в ответ на обработку ЛПС, Poly I:C и имиквимодом. Часть культур макрофагов, полученных от мутантных мышей, демонстрировала сниженный уровень продукции TNF в ответ на ЛПС. При этом не наблюдалось различий в продукции TNF макрофагами при обработке Poly I:C или имиквимодом. Предположительно, мыши этой мутантной линии имеют рецессивную мутацию в одном из компонентов TLR4 каскада, который включает в себя белки, связанные с переносом ЛПС на сигнальный рецептор TLR4, адаптерные молекулы, компоненты киназных сигнальных каскадов и транскрипционные факторы. Кроме того, возможны мутации в ферментах, обслуживающих эти каскады, или регуляторные мутации генома, регулирующие уровень экспрессии одного из компонентов TLR4 каскада. Предварительные результаты полноэкзомного секвенирования мутантных мышей не выявили изменений в кандидатных генах, что согласуется с гипотезой о регуляторном характере мутации. Проводится полногеномное секвенирование мутанта для определения природы мутации. Результаты работы могут расширить представления о сигнальном каскаде и молекулярных механизмах, лежащих в основе развития септического шока. Предполагается получить линию мутантных мышей с нарушением в работе одного из генов этого сигнального каскада. | ||
| 3 | 4 марта 2020 г.-28 февраля 2021 г. | Мутационный анализ сигнального каскада TLR4-TNF: в поисках новых регуляторов системы защиты организма |
| Результаты этапа: | ||
Прикрепленные к НИР результаты
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".