|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Получение и кристаллизация комплексов фруктозо-1,6-бисфосфатальдолазы из E.coliНИР
- Руководитель НИР: Назарова Т.И.
- Участники НИР: Воробьева Н.Н., Курилова С.А., Родина Е.В., Серебрякова М.В.
- Подразделение: Научно-исследовательский институт физико-химической биологии имени А.Н.Белозерского
- Срок исполнения: 30 июня 2014 г. - 10 октября 2014 г.
- Номер договора (контракта, соглашения): 1313.14.05
- Тип: Фундаментальная
- Приоритетное направление научных исследований: Структура и функции биологических макромолекул и макромолекулярных комплексов. Биокатализ.
- ПН России: Науки о жизни
-
Рубрики ГРНТИ:
- 29.19.19 Методы исследования кристаллической структуры и динамики решетки
- 34.15.15 Пространственная структура и свойства биополимеров
-
Ключевые слова:
космический эксперимент, кристаллизация
-
Описание:
В задачи данной работы входила проверка возможности получения комплекса альдолазы FbaВ из E.coli с кетосодержащим субстратом (фруктозо-1,6-бисфосфатом или же с диоксиацетонфосфатом), стабилизированного последующей обработкой боргидридом натрия NaBH4. Второй задачей настоящей работы было получение комплекса FbaВ с аллостерическим эффектором (АТР) или его аналогом. Чтобы выявить сайт связывания АТР на FbaВ и прояснить пути его эффекторного влияния, необходимо стабилизировать комплекс FbaВ с АТР путем ковалентной модификации. В работе была протестирована возможность связывания с FbaВ АМР, окисленного по гидроксильным группам под действием периодата натрия. Полученное ковалентное производное FbaB было также стабилизировано NaBH4. Был проведен скрининг условий кристаллизации двух ковалентных производных белка, подобраны условия кристаллизации в капле.
-
Основные результаты:
Производное FbaВ по активному центру с модификацией под действием субстрата было получено и стабилизировано NaBH4. Включение субстрата (диоксиацетонфосфата) было показано масс-спектрометрически. Модификация по активному центру была доказана полным исчезновением каталитической активности. Была разработана методика получения производного FbaB с различной стехиометрией модификации. Производное FbaB по аллостерическому центру с модификацией под действием реакционноспособного аналога АТР было получено и также стабилизировано NaBH4. Количественно включение адениновой группировки в белок определяли спектрофотометрически. В различных аналитических экспериментах включение составляло от 1,0 до 2,2 моль на моль белка; для препаративного получения были выбраны условия, в которых степень модификации близка к стехиометрической (1:1). Стабилизированные производные белка после осаждения сульфатом аммония были наработаны препаративно, очищены хроматографически, сконцентрированы и далее использованы для скрининга условий кристаллизации. Для обоих производных FbaВ были подобраны условия кристаллизации в висячей капле. Они могут служить основой для подбора условий кристаллизации в капиллярах, пригодных для использования в условиях микрогравитации на РС МКС.
- Добавил в систему: Назарова Татьяна Ивановна
Источник финансирования НИР
| Хоздоговор, «МКС» (Надежность-Наука) ИК – 3 |
Этапы НИР
| # | Сроки | Название |
| 1 | 30 июня 2014 г.-10 октября 2014 г. | Получение и кристаллизация комплексов фруктозо-1,6-бисфосфатальдолазы из E.coli |
| Результаты этапа: Объектом настоящего исследования является бактериальный фермент метаболизма углеводов, фруктозо-1,6-бисфосфатальдолаза класса I из Escherichia coli (FbaB). В результате выполнения СЧ ОКР были получены два ковалентных производных этого фермента. На первом этапе с целью идентификации сайта связывания АТР была получена FbaB, модифицированная аналогом АМР, окисленным под действием периодата натрия. Полученный комплекс был далее стабилизирован под действием боргидрида натрия. Были подобраны условия, позволяющие получить производное белка со стехиометрическим включением модификатора (1:1). На второй стадии работы было получено производное FbaB с кето-содержащим субстратом (диоксиацетонфосфатом), стабилизированное боргидридом натрия. Для обоих производных FbaB были подобраны условия кристаллизации, позволяющие получить кристаллы дифракционного качества. Они могут служить основой для подбора условий кристаллизации в капиллярах, пригодных для использования в условиях микрогравитации на РС МКС. | ||
Прикрепленные к НИР результаты
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".