ИСТИНА

Для получения кристаллической структуры альдолазы Fba-I из E.coli ранее были получены кристаллы. Однако структуру не удалось решить вследствие разных причин, одной из которых является конформационная гетерогенность белка. Одним из подходов к решению этой проблемы является закрепление "закрытой" формы белка (с заполненным активным центром) за счет ковалентной модификации групп активного центра. В литературе описано использование BAEP (N- бромоацетилэтаноламинфосфата) для мечения остатков гистидина в активном центре альдолаз. В задачи данной работы входила проверка возможности модификации этим соединением альдолазы Fba-I из E.coli; оптимизация методики получения модифицированного фермента; подбор условий кристаллизации модифицированного фермента. Вторым объектом данного исследования является 5-кето-4-дезоксиуронатизомераза (KduI). В нашей лаборатории ранее было показано, что in vitro белок KduI катализирует реакцию обратимой изомеризации глюкозо-6-фосфата в фруктозо-6-фосфат. Детали каталитического механизма могут быть описаны только на основании структуры KduI в комплексе с субстратом. Ранее были подобраны условия сокристаллизации KduI с субстратом, однако из-за низкого сродства к субстрату желаемый комплекс не образуется. Решением этой проблемы также могло бы быть получение производного KduI, ковалентно модифицированного под действием BAEP. В литературе такая модификация KduI не была описана, однако по аналогии с другими ферментами, связывающими глюкозо-6-фосфат, можно было надеяться, что и KduI будет модифицироваться этим соединением. Таким образом, в задачи данной работы входила проверка возможности модификации KduI из E.coli под действием BAEP; оптимизация условий модификации; подбор условий кристаллизации модифицированного фермента.

1. Синтезирован N-бромоацетилэтаноламинфосфат. 2. Разработана методика ковалентной модификации фруктозо-1,6-бисфосфатальдолазы (Fba-I) и 5-кето-4-дезоксиуронатизомеразы (KduI) из E.coli N-бромоацетилэтаноламинфосфатом. 3. Получены препаративные количества производных Fba-I и KduI. 4. Предложены условия кристаллизации, позволяющие получить кристаллы модифицированных производных Fba-I и KduI, пригодные для съемки дифракционных данных.