![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Цель исследования - изучение молекулярных механизмов процесса старения и использование антиоксидантов на основе проникающих катионов, специфически адресованных внутрь митохондрий. Такого рода антиоксиданты предполагается использовать для терапии возраст-зависимых функциональных расстройств организма и замедления процесса старения. Была доказана их фармакологическая эффективность с потенциальной возможностью лечения множества патологий, включая глазные, нейрональные, сердечно-сосудистые, нефрологические, кожные и онкологические заболевания и идет разработка лекарственных форм на их основе, обеспечивающих эффективное применение в медицинской практике. Параллельно планируется изучить особенности биологических видов, у которых процесс старения замедлен или отсутствует. В рамках этого направления предполагается исследовать голого землекопа Heterocephalus glaber. Предварительные исследования показали, что организм этого зверька и его митохондрии в зрелом возрасте сохраняют целый ряд «ювенильных» признаков, которые у других животных исчезают после рождения. С помощью метода черных мембран исследовать новые классы разобщителей. Продолжить изучение бактериальной НАДН оксидоредуктазы. Продолжить изучение механизмов регуляции и поиск новых регуляторных эффекторов митохондриальной цитохромоксидазы. В ближайшие планы входит исследование регуляции цитохром с оксидазы митохондрий за счет взаимодействия лигандов с консервативной амфипатической площадкой вблизи протонного канала К в каталитической субъединице I фермента. Планируется также использовать метод фемтосекундной абсорбционной спектроскопии для измерения и анализа спектрально-временных характеристик спектральных интермедиатов цитохром с оксидазы, возникающих во временном интервале 80 фс 20 пс.
The aid is to study the molecular mechanisms of aging and application of anti-oxidants based on penetrating cations/ specifically addressed to inside of mitochondria. Antioxidants of such a type are planned to be used for therapy of aging-dependent pathologies and thus to slow down the process of aging itself. Its pharmacologic effectiveness with potential possibility of treatment of multiple pathologies including ophthalmic, neuronal, cardiovascular, neuphrologic, dermal and oncologic deseases has been already proved and now pharmacologic drugs based on this substances are upon development. In parallel the study of special features of biological species characterized by a delayed aging process or absent of it at all is planned. Within a framework of this route it is supposed to study Heterocephalus glaber. Preliminary data demonstrate that mature organism of this animal and its mitochondria retained a number of juvenile attributes which other organisms lose after birth. To use the method of “black membranes” to detect new classes of uncouplers. To keep on the study of bacterial NADH oxidoreductase and mitochondrial cytochrome oxidase (CcO) To focuse sdudies of CcO on the mechanisms of its regulation and serch of its new regulatory effectores. Femtoseconds absorption spectroscopy method applied to study spectral-kinetic characteristics of cytochrome oxidase intermediates? Appered within a time range 80fs-20ps is also planned.
В 2020-2021 годах будет продолжена разработка новых митохондриально-направленных флуоресцентных зондов для детекции окисления кардиолипина. Предполагается, что увеличение положительного заряда зондов может повысить избирательность их действия по отношению к основному отрицательно-заряженному фосфолипиду митохондрий –кардиолипину. Будет продолжено изучение процессов окисления митохондриальногокардиолипина в различных клеточных моделях. Будет исследована возможная роль окисления кардиолипина в регуляции аутофагии. Кроме того, планируется изучить защитную роль митофагии в условиях окислительного стресса и при различных нарушениях работы митохондрий, в том числе в условиях гипоксии или гипергликимии. Планируется также провести разработку методики, которая позволит на проточном флуориметре получить информацию не только о популяциях митохондрий в суспензии или в клетках, но и оценить внутреннее содержимое митохондрий, соответствующее конфигурации митохондриального матрикса. С помощью проточной флуориметрии и флуоресцентного зонда TMRE, а также используя метод флуоресцентной корреляционной спектроскопии планируется охарактеризовать популяции митохондрий, изолированных из различных органов (почка, мозг) различных животных (молодых, старых; интактных, после повреждения). Полученные данные позволят произвести оценку распределения мембранного потенциала в митохондриях по их популяциям в клетках органов старых крыс и у линии крыс, характеризующихся преждевременным старением с сравнением аналогичных параметров у молодых животных. В 2021 году при использовании клеточных моделей (сокультивирования и разных способов альтерирующего воздействия, таких как кислородно-глюкозная депривация или ингибиторы межклеточного взаимодействия) и физиологических моделей повреждения (травма головного мозга и/или ишемическое или токсическое повреждение мозга или почки)планируется провести исследование возможности участия митохондрий в регенерации поврежденной ткани, и выяснить, насколько ускорение или подавление межклеточного транспорта митохондрий через суперэкспрессию и подавление элементов, участвующих в транспорте митохондрий (например, Miro1) приведет к активации/ухудшению репаративных процессов в ткани. В 2020-21гг планируется выявить роль различных NADH:хинон оксидоредуктаз в дыхательной цепи почвенной бактерии Azotobactervinelandii(несопряженного, протон- и натрий транслоцирующих ферментов) в диазотрофном росте этого микроорганизма. Будут сконструированы изогенные штаммы A.vinelandii с нарушенным синтезом каждой из трех NADH:хиноноксидоредуктаз и установлены ростовые характеристики этих штаммов при различной концентрации связанного азота и молекулярного кислорода в ростовых средах. В 2020-21гг предполагается, во-первых, расширить круг эффекторов митохондриальной ЦО среди разнообразных физиологически активных соединений стероидной структуры, как природных, так и синтетических. Во-вторых, интересно исследовать механизм действия подобных соединений на фермент, имеющий, судя по всему, специальный сайт связывания для достаточно широкого их круга. Решение этих задач станет существенным шагом в понимании основных регуляционных связей клеточного метаболизма.
Завершена разрабатка нового митохондриально-направленного флуоресцентного зонда MitoCLox для детекции перекисного окисления фосфолипидов в митохондриальной мембране. Проведено исследование развития острого повреждения почек и гибели животных в модели сочетанной травмы при ишемии/реперфузии почки на фоне системного введения митохондрий. Проведено исследование важности различных консервативных аминокислотных остатков NqrC для его флавинилирования. Показано, что гормоны трийод-тиронин, эстрадиоли тестостерон, а также близкий к ним по структуре холекальциферол (витамин Д3) способны модулировать работу цитохромоксидазы, связываясь в специальном центре связывания жирных кислот в каталитической субъединицы I близи входа в протонный канал К.
В 2019 году была завершена разрабатка нового митохондриально-направленного флуоресцентного зондаMitoCLoxдля детекции перекисного окисления фосфолипидов в митохондриальной мембране. Исследования на искусственных мембранах (липосомах) подтвердили эффективность нового зонда и показали его избирательность по отношению к кардиолипину. Эти данные подтвердились в опытах с изолированными митохондриями. В опытах с культурами клеток различного типа была продемонстрирована избирательность накопленияMitoCLox в митохондриях. Была разработана методика измерения уровня окисленностимитохондриальных фосфолипидов с помощью нового зонда с применением проточной цитофлуориметрии. Измерения с помощью MitoCLoxподтвердили высокую эффективность митохондриально-направленного антиоксиданта SkQ1 в различных моделях окислительного стресса. Флуоресцентная микроскопия с применением MitoCLox позволила выявить гетерогенность популяции митохондрий в клетках эндотелия. Была обнаружена небольшая популяция митохондрий с повышенным уровнем окисленностиMitoCLox и с пониженным мембранным потенциалом. Эти митохондрии могут играть важную роль в нормальной физиологии клетки. В культуре клеток миобластов с помощью MitoCLox была выявлена субпопуляция клеток с повышенным уровнем окисленностимитохондриальных фосфолипидов. Содержание таких клеток возрастало в условиях, которые способствовали их дифференцировке. Предполагается, что митохондриальный окислительный стресс является необходимым условием для инициации миогенной дифференцировки. Было проведено исследование развития острого повреждения почек и гибели животных в модели сочетанной травмы при ишемии/реперфузии почки на фоне системного введения митохондрий. Показано, что внутрибрюшинное введение митохондрий вызывает появление в периферической крови митохондриальной ДНК, что может активировать клетки врожденного иммунитета, вызывая нейтрофилез и лейкоцитоз. При введении митохондрий, как и при ишемии/реперфузии почки, наблюдаются провоспалительные изменения, в первую очередь лейкоцитоз и гранулоцитоз. Сочетание ишемии/реперфузии с введением митохондрий вызывает резкое увеличение гибели животных, что может указывать на связь активации TLR-сигнализации и высокой смертности пациентов при сочетанных травмах и полиорганной недостаточности в условиях реанимационных отделений. Лечение митохондриально-адресованным антиоксидантом приводило к увеличению выживания животных, что предполагает участие митохондриальных активных форм кислорода в развитии системного воспалительного ответа и гибели организма при острой почечной недостаточности. Проведено исследование важности различных консервативных аминокислотных остатков NqrC для его флавинилирования. Механизм ApbE-зависимого флавинилирования на настоящий момент неизвестен. На первом этапе флавинилирования субстраты реакции, FAD и белок-мишень, связываются с ApbE. Дальнейшее развитие событий может заключаться в образовании фосфоэфирной связи между Thr(Ser) и остатком FMN с дальнейшим переносом этого остатка из центра связывания флавина в ApbE во флавин-связывающий центр NqrC. Альтернативное развитие событий может состоять в переносе FMN-части молкулыFAD из ApbE во флавин-связывающий центр NqrC с последующим разрывом фосфоангидридной связи в FAD и образованием фосфоэфирной связи между остатком FMN и Thr(Ser). Для проверки этих альтернативных гипотез были сконструированы варианты NqrC с заменой аминокислотных остатков, участвующих в связывании изоаллоксазинового кольца FMN (Leu180Asp и Thr231Ala). Показано, что проведенные мутации приводят к существенному изменению спектра поглощения вариантов NqrC, свидетельствующему о том, что изоаллоксазиновое кольцо FMN в этих мутантных формах не связано с белком и экспонировано в водную фазу. В то же время мутантные варианты NqrC оказались способны подвергаться флавинилированию под действием ApbE. Эти данные означают, что в ходе флавинилирования реакция образования фосфоэфирной связи предшествует переносу FMN из центра связывания флавина в ApbE во флавин-связывающий центр белка-мишени. Показано, что гормоны трийод-тиронин, эстрадиоли тестостерон, а также близкий к ним по структуре холекальциферол (витамин Д3) способны модулировать работуцитохромоксидазы, связываясь в специальном центре связывания жирных кислот, который локализован на внутренней стороне каталитической субъединицы I близи входа в протонный канал К, доставляющий в каталитический центр фермента протоны, необходимые для образования воды.Полученные результаты указывают на возможность существования неизвестного ранее пути влияния гормонов на окислительное фосфорилирование: через прямое взаимодействие с ключевым ферментом дыхательной цепи, вызывающее изменение его активности.
госбюджет, раздел 0110 (для тем по госзаданию) |
# | Сроки | Название |
1 | 1 января 2019 г.-31 декабря 2019 г. | Исследование механизмов преобразования энергии в мембранных системах, связанное с циклическим переносом ионов водорода и натрия ферментами электрон-транспортных цепей, механизмов продукции активных форм кислорода и их роли в физиологии клетки |
Результаты этапа: В 2019 году активно разрабатывался новый митохондриально-направленный краситель MitoCLox для детекции перекисного окисления митохондриальной мембраны. Были проведены исследования на липосомах, митохондриям и культурах клеток. Было проведено исследование развития острого повреждения почек и гибели животных в модели сочетанной травмы при ишемии/реперфузии почки на фоне системного введения митохондрий. Показано, что внутрибрюшинное введение митохондрий вызывает появление в периферической крови митохондриальной ДНК, что может активировать клетки врожденного иммунитета, вызывая нейтрофилез и лейкоцитоз. При введении митохондрий, как и при ишемии/реперфузии почки, наблюдаются провоспалительные изменения, в первую очередь лейкоцитоз и гранулоцитоз. Сочетание ишемии/реперфузии с введением митохондрий вызывает резкое увеличение гибели животных, что может указывать на связь активации TLR-сигнализации и высокой смертности пациентов при сочетанных травмах и полиорганной недостаточности в условиях реанимационных отделений. Лечение митохондриально-адресованным антиоксидантом приводило к увеличению выживания животных, что предполагает участие митохондриальных активных форм кислорода в развитии системного воспалительного ответа и гибели организма при острой почечной недостаточности. Проведено исследование важности различных консервативных аминокислотных остатков NqrC для его флавинилирования. Механизм ApbE-зависимого флавинилирования на настоящий момент неизвестен. На первом этапе флавинилирования субстраты реакции, FAD и белок-мишень, связываются с ApbE. Дальнейшее развитие событий может заключаться в образовании фосфоэфирной связи между Thr(Ser) и остатком FMN с дальнейшим переносом этого остатка из центра связывания флавина в ApbE во флавин-связывающий центр NqrC. Альтернативное развитие событий может состоять в переносе FMN-части молкулы FAD из ApbE во флавин-связывающий центр NqrC с последующим разрывом фосфоангидридной связи в FAD и образованием фосфоэфирной связи между остатком FMN и Thr(Ser). Для проверки этих альтернативных гипотез были сконструированы варианты NqrC с заменой аминокислотных остатков, участвующих в связывании изоаллоксазинового кольца FMN (Leu180Asp и Thr231Ala). Показано, что проведенные мутации приводят к существенному изменению спектра поглощения вариантов NqrC, свидетельствующему о том, что изоаллоксазиновое кольцо FMN в этих мутантных формах не связано с белком и экспонировано в водную фазу. В то же время мутантные варианты NqrC оказались способны подвергаться флавинилированию под действием ApbE. Эти данные означают, что в ходе флавинилирования реакция образования фосфоэфирной связи предшествует переносу FMN из центра связывания флавина в ApbE во флавин-связывающий центр белка-мишени. Показано, что гормоны трийод-тиронин, эстрадиол и тестостерон, а также близкий к ним по структуре холекальциферол (витамин Д3) способны модулировать работу цитохромоксидазы, связываясь в специальном центре связывания жирных кислот, который локализован на внутренней стороне каталитической субъединицы I близи входа в протонный канал К, доставляющий в каталитический центр фермента протоны, необходимые для образования воды. Полученные результаты указывают на возможность существования неизвестного ранее пути влияния гормонов на окислительное фосфорилирование: через прямое взаимодействие с ключевым ферментом дыхательной цепи, вызывающее изменение его активности. | ||
2 | 1 января 2020 г.-31 декабря 2020 г. | Исследование механизмов преобразования энергии в мембранных системах, связанное с циклическим переносом ионов водорода и натрия ферментами электрон-транспортных цепей, механизмов продукции активных форм кислорода и их роли в физиологии клетки |
Результаты этапа: В рамках гостемы в 2020 году было проведено многоплановое исследование. Новые флуоресцентные зонды, адресованные в митохондрии, помогли подробно изучить окисление митохондриального кардиолипина и его роль в регуляции аутофагии в различных клеточных моделях. Показана важная роль АФК, производимых в митохондриях, в воспалительной и аллергической активации. Получено 2 патента на разработку тест-модели для исследования действия лекарственных препаратов на заболевание рассеянным склерозом in vitro, позволяющую достоверно оценить степень непосредственного воздействия лекарственных препаратов. Открыта новая натрий-перекачивающая цитохромоксидаза, обнаруженная у экстремоалкалифильных микробов. Фермент позволяет избежать проблемы низкого уровня мембранного дельта-мю Н+ в экстремально щелочных условиях, эффективно преобразуя его в дельта-мю Na+. C целью подобрать условия и разработать модели защиты от альтерирующего воздействия ишемии-реперфузии были исследованы последствия этого воздействия на моделях органа (почки и мозга) и травмы (мозг), а для клеточных культур – кислородно- глюкозная депривация как модель ишемии. Изучено также положительное влияние ограничения калорийности (ОК) на ишемию-реперфузию, проявляющееся только у молодых крыс. В результате обобщения современных знаний об изменениях внутриклеточных механизмов контроля Na+ и Ca2+ в процессе заболевания и их последствия для митохондриального гомеостаза Ca2+ сделано предположение, что окислительно-восстановительный статус сердца вместе с цитоплазматическими концентрациями Na+ могут действовать как регуляторы митохондриального уровня Ca2+ в этой патологии и ответа, который в конечном итоге будет стимулировать поставку АТФ и регулировать окислительный стресс. Используя клетки дрожжей с регулируемым уровнем экспрессии переносчика адениновых нуклеотидов AAC2, была исследована взаимосвязь активности AAC2 со структурой митохондрий, показавшая, что снижение экспрессии AAC2 практически полностью блокирует обмен АТФ и АДФ между матриксом митохондрий и цитоплазмой, а также вызывает фрагментацию митохондрий. Было показано, что разобщители оказались эффективными индукторами системы множественной лекарственной устойчивости АВС, что снижает эффективность антигрибкового действия стандартных азольных антимикотиков. Показано, что эстрадиол, тестостерон и другие стероидные гормоны ингибируют цитохром с оксидазу (ЦО) из сердца быка. Предполагается, что гормоны могут связываться с ЦО в специальном сайте связывания желчных кислот, описанным недавно группой Фергюсон-Миллер, и нарушать транспорт протонов по К-каналу. Результаты указывают на возможность существования неизвестного ранее пути влияния гормонов на окислительное фосфорилирование: через прямое взаимодействие с ключевым ферментом дыхательной цепи, вызывающее изменение его активности. Полученные в 2020г мутантные штаммы почвенной азотофиксирующей бактерии Azotobacter vinelandii с инактивированными NADH:хинон оксидоредуктазами NDH-1, NQR и NDH-2 позволили показать, что NQR является единственным генератором натриевого потенциала в дыхательной цепи A. vinelandii и инактивация этого фермента может приводить к отсутствию движущей силы для работы RNF и к недостатку восстановленного ферредоксина (флаводоксина) для работы нитрогеназного комплекса. | ||
3 | 1 января 2021 г.-31 декабря 2021 г. | Исследование механизмов преобразования энергии в мембранных системах, связанное с циклическим переносом ионов водорода и натрия ферментами электрон-транспортных цепей, механизмов продукции активных форм кислорода и их роли в физиологии клетки |
Результаты этапа: С помощью митохондриально-направленных зондов на основе SkQ1 в рамках гостемы в 2021 году было проведено многоплановое исследование участия митохондрий в регуляции воспалительных реакций и патологий, связанных с окислительным стрессом, а также детекции окисления кардиолипина.. В частности, проанализировано участие митохондрий в нейтрофильном воспалениии и нарушении функций эндотелия при острых легочных инфекциях, включая COVID-19. Продолжено изучение участия митохондрий в регуляции аутофагии и роли различных механизмов элиминации дефектных митохондрий в клеточной физиологии. Методом электронной микроскопии проанализирована роль митохондриального аппарата в процессах старения. Сравнение состояния митохондрий скелетных мышц у быстро стареющих организмов (мышей и крыс Wistar и OXYS) и нестареющего голого землекопа показало, что у голого землекопа наблюдается нарастающая с возрастом эффективность работы фосфорилирующей системы, предупреждающая развитие саркопении, что отличает его от мышей, крыс Wistar и OXYS, где обусловленные возрастом нарушения структурной организации митохондриального аппарата могут являться одной из основных причин развития возраст-зависимых патологий. Методом крио-электронной томографии впервые удалось реконструировать надмолекулярную структуру крист внутренней мембраны митохондрий и показать, что ряды суперкомплексов ферментов дыхательной цепи могут стыковаться с рядами АТФ-синтаз, образуя организованные структурные кластеры. Подвергнута сомнению положительная роль так называемого «мягкого» разобщения окислительного фосфорилирования, основная суть которого состоит в направленном уменьшении эффективности работы энергетической машины митохондрий, производящей АТР, Анализ показал, что наряду с явно положительными эффектами, мягкое разобщение сопровождается рядом трудно контролируемых и достаточно опасных процессов в клетке и организме, которые особенно выражены при работе головного мозга. Показано, что в разобщающем действии динитрофенола (ДНФ) участвует АДФ-АТФ-транслокатор (ANT), причем активное участие во взаимодействии ДНФ с ANT принимает аргинин 79. Изучен также механизм множественной лекарственной устойчивости у пекарских дрожжей и роль в этом процессе АВС-переносчиков. В рамках изучения молекулярного механизма преобразования энергии в биологических мембранах, связанного с циклической трансмембранной транслокацией ионов натрия, сделано заключение, что у A. vinelandii RNF-комплексы, катализирующие перенос электронов между ферредоксином и NAD+, сопряженный с векторным переносом Na+ через цитоплазматическую мембрану,. являются основным источником необходимых для азотофиксации низкопотенциальных восстановителей, а флавин трансфераза ApbE вовлечена в флавинилирование этих комплексов и необходима для их ферментативной активности. Показано, что механизм ингибирования цитохромоксидазы (ЦО) детергентом тритоном Х-100 сходен с механизмом действия на нее стероидных и тироидных гормонов и определяется нарушением движения протонов по К-каналу. | ||
4 | 1 января 2022 г.-31 декабря 2022 г. | Исследование механизмов преобразования энергии в мембранных системах, связанное с циклическим переносом ионов водорода и натрия ферментами электрон-транспортных цепей, механизмов продукции активных форм кислорода и их роли в физиологии клетки |
Результаты этапа: Продолжение исследований участия митохондрий в регуляции воспалительных реакций позволило показать, что «роение» нейтрофилов, а также образование нейтрофильных внеклеточных ловушек (NET) зависят от митохондриальных АФК. Получены важные данные по обоснованию гипотезы, согласно которой АТФ-синтаза (F1Fo) может кроме установленного транспорта протонов, также осуществлять транспорт ионов калия и синтезировать АТФ за счет градиента К+. Показано, что АТФ-синтаза выполняет функции первичного митохондриального К+ “унипортера”. Компьютерное моделирование позволяет оценить роль K-движущей силы в модуляции энергетических характеристик митохондрий. Полученные результаты подтверждают имеющиеся экспериментальные данные о синтезе АТФ, обусловленном транспортом K+ и H+ через АТФ-синтазу F1Fo. Использование штаммов пекарских дрожжей с делецией генов ингибиторных белков InhIpи/илиStfIp, а также штамма, в котором снижено АДФ-ингибирование АТФазной активности протонной F1Fo АТФ-синтазы показало роль исследуемых регуляторных механизмов ингибирования АТФ-азной активности в сохранении жизнеспособности дрожжевой клетки, в частности при голодании. Изучение взаимосвязи клеточной энергетики и системы лекарственной резистентности дрожжей показало, что дефицит углерода в стационарной фазе роста дрожжей приводит к значительному снижению содержание в клетках ABC-переносчиков с широкой субстратной специфичностью. Использование двух независимых подходов (длинноволнового сдвига полос поглощения гема а2+, вызываемого ионами Са2+ и фотовыцветание полос гемов, вызываемое фемтосекундными лазерными вспышками) позволило реконструировать индивидуальные спектры восстановленных гемов, которые характеризуются расщеплением электронных переходов B0x-, B0y. , длинноволновым сдвигом гема а2+ по отношению к гему а3.и плечом при ~425нм, принадлежащим гему а32+. Доказано, что энергетика бактерий Thioalkalivibrio действительно базируется на использовании натриевого насоса на конце дыхательной цепи - Na+-транспортирующей цитохром-с-оксидазы (ЦО) . Впервые показано, что терминальная оксидаза обладает функцией первичного транспортера Na+ и генерирует высокий электрический потенциал. Разобщение под действием BAM15 более чувствительно к КАТР в митохондриях сердца, чем в печени. В обоих случаях ингибитор антипортера вызывает частичное ресопряжение митохондрий. Эти результаты свидетельствуют об участии белка внутренней мембраны митохондрий в разобщающем действии BAM15. | ||
5 | 1 января 2023 г.-31 декабря 2023 г. | Исследование механизмов преобразования энергии в мембранных системах, связанное с циклическим переносом ионов водорода и натрия ферментами электрон-транспортных цепей, механизмов продукции активных форм кислорода и их роли в физиологии клетки |
Результаты этапа: | ||
6 | 1 января 2024 г.-31 декабря 2024 г. | Исследование механизмов преобразования энергии в мембранных системах, связанное с циклическим переносом ионов водорода и натрия ферментами электрон-транспортных цепей, механизмов продукции активных форм кислорода и их роли в физиологии клетки |
Результаты этапа: | ||
7 | 1 января 2025 г.-31 декабря 2025 г. | Исследование механизмов преобразования энергии в мембранных системах, связанное с циклическим переносом ионов водорода и натрия ферментами электрон-транспортных цепей, механизмов продукции активных форм кислорода и их роли в физиологии клетки |
Результаты этапа: |
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".