![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Будут исследованы молекулярно-клеточные механизмы развития тяжѐлых микрореологических расстройств, выражающихся в повышенной агрегации эритроцитов у людей, больных сахарным диабетом, и малых лабораторных животных с экспериментально вызванным сахарным диабетом и сопутствующими заболеваниями (артериальной гипертензией и др.). В качестве основных методов исследования будут использованы агрегометрия на основе диффузного светорассеяния от проб цельной крови, а также анализ гиперагрегационной способности эритроцитов на макромолекулярном уровне с помощью оптической ловушки. Кроме того, будут контролироваться вязкость цельной крови и плазмы крови, содержание фибриногена и агрегация тромбоцитов. Все измерения будут проводиться in vitro.
1. Первая группа результатов относится к анализу микрореологические свойств эритроцитов в пробах крови, взятых у пациентов с диагнозом сахарный диабет (СД) первого и второго типов (СД1 и СД2). Всего в этом году с использованием ранее разработанных протоколов было обследовано 36 человек (26 женщин и 16 мужчин). Контролем служила кровь 22 клинически здоровых людей. При измерении in vitro из состояния полной дезагрегации первый этап спонтанной агрегации эритроцитов связан с образованием монетных столбиков, затем образуются более крупные и стабильные трехмерные агрегаты. При сравнении двух типов диабета обнаружено ускорение первичной агрегации эритроцитов при СД2, но гидродинамическая прочность агрегатов была ниже по сравнению с СД1. Время образования трехмерных агрегатов существенно уменьшается на 20 % по сравнению с контрольной группой, что является проявлением гиперагрегационного синдрома. Агрегационная cпособность эритроцитов связана с их cпособностью деформироваться в сдвиговом потоке. Последняя уменьшается на 6-10% по сравнению с контрольной группой. Было показано, что уменьшение индекса деформируемости эритроцитов при СД главным образом связано с увеличением жесткости мембраны эритроцитов. Оказалось, что жесткость мембраны эритроцитов была повышена, а внутренняя вязкость снижена при СД2 в сравнении с СД1. При СД2 инсулин не влиял на параметры агрегации и деформируемости эритроцитов. При СД1 наблюдали увеличение сдвиговой дезагрегации эритроцитов после инкубации крови с инсулином. 2. Измерения на цельной крови крыс показали, что эритроцитам контрольных животных требуется время 6,6 ± 1,5 секунд для образования монетных столбиков и 46,9 ± 3,4 секунд для образования крупных агрегатов при спонтанной агрегации в кювете. При СД время образования монетных столбиков не отличалось от контроля, но быстрее образовывались крупные агрегаты. Проявлением гиперагрегационного синдрома выступает тот факт, что прочность эритроцитарных агрегатов у крыс со стрептозотоцин индуцированным СД увеличилась на 26,5%. Если подобный эффект имеет место in vivo, то он не может не приводить к ухудшению микроциркуляции. Индекс деформируемости эритроцитов у диабетических крыс оказался немного увеличенным только при низких скоростях сдвига – 9,4 и 14,1 с-1 . Вязкость цельной крови крыс с вазоренальной гипертензией практически не отличалась от таковой у контрольных ложнооперированных крыс (3,6 + 0,15 cП). Вязкость крови крыс со стрептозотоциновым СД была значимо выше - 5,1 + 0,2 cП. Вязкость плазмы крови крыс с СД, осложненным вазоренальной гипертензией была повышена на 18%. Основной вклад в вязкость плазмы крови вносят высокомолекулярные белки, такие как фибриноген с молекулярной массой 300 кДа. Оказалось, что при СД по сравнению с контролем (265 мг/дл) содержание фибриногена значимо возросло до 301 мг/дл. 3. Измерения времени образования дублетов эритроцитов в аутологичной плазме, проведенные с помощью двухканального лазерного пинцета, показали значительное различие между временем агрегации в крови здорового донора (T = 13 ± 3.3 сек, N = 20) и в крови пациента, страдающего диабетом 2-го типа: (T = 5.7 ± 1.4 сек, N = 7). Эти результаты также свидетельствует о ускоренной агрегации эритроцитов при диабете. 4. Корреляционный анализ полученных результатов показал, что имеет место связь между степенью выраженности гиперагрегационного синдрома с силами взаимодействия между эритроцитами в отдельных агрегатах в крови крыс и людей, а также с другими показателями крови, характеризующими данные заболевания, в частности, деформируемостью эритроцитов под действием сдвиговых напряжений и содержанием высокомолекулярных белков, например, фибриногена в плазме крови. Повышенное содержание последнего проявляется в повышении вязкости цельной крови. 5. Наличие у пациентов артериальной гипертензии в качестве заболевания, сопутствующего СД, которое само по себе сказывается на микрореологических параметроах крови, делает корреляционные соотношения менее явными. Поэтому исследование «чистых» эффектов (без сопутствующих заболеваний) на экспериментальных животных позволяет упростить корреляционный анализ. Окончательные выводы этого анализа будут сделаны на следующем этапе после набора большей статистики.
грант РФФИ |
# | Сроки | Название |
2 | 1 января 2014 г.-31 декабря 2014 г. | Комплексное исследование механизмов развития синдрома гиперагрегации эритроцитов при сахарном диабете |
Результаты этапа: В соответствии с протоколами, разработанными на предыдущем этапе, проведено комплексное определение ряда (свыше 10) параметров эритроцитов, цельной крови и сердечно-сосудистой системы, характеризующих гиперагрегационный синдром у лабораторных животных (крыс) с экспериментально вызванными заболеваниями (сахарным диабетом без и с сопутствующей артериальной гипертензией) и у людей с сахарным диабетом и сопутствующей артериальной гипертензией. Это такие параметры как: характерное время образования линейных агрегатов эритроцитов, характерное время образования 3-х мерных агрегатов, гидродинамическая прочность агрегатов, время образования дуплетов эритроцитов в разных средах, включая аутологическую плазму, прочность контакта между индивидуальными эритроцитами, индекс деформируемости эритроцитов при различных сдвиговых напряжениях, вязкость цельной крови, вязкость плазмы, артериальное давление, частота сердечных сокращений и пр. Параметры эритроцитов измерялись in vitro оптическими методами. В частности, было исследовано влияние на агрегационные параметры эритроцитов инкубирования крови с инсулином. Корреляционный анализ полученных результатов показал, что имеет место связь между степенью выраженности гиперагрегационного синдрома с силами в заимодействия между эритроцитами в отдельных агрегатах в крови крыс и людей, а также с другими показателями крови, характеризующими данные заболевания, в частности, деформируемостью эритроцитов под действием сдвиговых напряжений и содержанием высокомолекулярных белков, например, фибриногена в плазме крови. Повышенное содержание последнего проявляется в повышении вязкости цельной крови. | ||
3 | 1 января 2015 г.-31 декабря 2015 г. | Комплексное исследование механизмов развития синдрома гиперагрегации эритроцитов при сахарном диабете |
Результаты этапа: 1. Первая группа результатов относится к анализу микрореологические свойств эритроцитов в пробах крови, взятых у пациентов с диагнозом сахарный диабет (СД) первого и второго типов (СД1 и СД2). Всего в этом году с использованием ранее разработанных протоколов было обследовано 36 человек (26 женщин и 16 мужчин). Контролем служила кровь 22 клинически здоровых людей. При измерении in vitro из состояния полной дезагрегации первый этап спонтанной агрегации эритроцитов связан с образованием монетных столбиков, затем образуются более крупные и стабильные трехмерные агрегаты. При сравнении двух типов диабета обнаружено ускорение первичной агрегации эритроцитов при СД2, но гидродинамическая прочность агрегатов была ниже по сравнению с СД1. Время образования трехмерных агрегатов существенно уменьшается на 20 % по сравнению с контрольной группой, что является проявлением гиперагрегационного синдрома. Агрегационная cпособность эритроцитов связана с их cпособностью деформироваться в сдвиговом потоке. Последняя уменьшается на 6-10% по сравнению с контрольной группой. Было показано, что уменьшение индекса деформируемости эритроцитов при СД главным образом связано с увеличением жесткости мембраны эритроцитов. Оказалось, что жесткость мембраны эритроцитов была повышена, а внутренняя вязкость снижена при СД2 в сравнении с СД1. При СД2 инсулин не влиял на параметры агрегации и деформируемости эритроцитов. При СД1 наблюдали увеличение сдвиговой дезагрегации эритроцитов после инкубации крови с инсулином. 2. Измерения на цельной крови крыс показали, что эритроцитам контрольных животных требуется время 6,6 ± 1,5 секунд для образования монетных столбиков и 46,9 ± 3,4 секунд для образования крупных агрегатов при спонтанной агрегации в кювете. При СД время образования монетных столбиков не отличалось от контроля, но быстрее образовывались крупные агрегаты. Проявлением гиперагрегационного синдрома выступает тот факт, что прочность эритроцитарных агрегатов у крыс со стрептозотоцин индуцированным СД увеличилась на 26,5%. Если подобный эффект имеет место in vivo, то он не может не приводить к ухудшению микроциркуляции. Индекс деформируемости эритроцитов у диабетических крыс оказался немного увеличенным только при низких скоростях сдвига – 9,4 и 14,1 с-1 . Вязкость цельной крови крыс с вазоренальной гипертензией практически не отличалась от таковой у контрольных ложнооперированных крыс (3,6 + 0,15 cП). Вязкость крови крыс со стрептозотоциновым СД была значимо выше - 5,1 + 0,2 cП. Вязкость плазмы крови крыс с СД, осложненным вазоренальной гипертензией была повышена на 18%. Основной вклад в вязкость плазмы крови вносят высокомолекулярные белки, такие как фибриноген с молекулярной массой 300 кДа. Оказалось, что при СД по сравнению с контролем (265 мг/дл) содержание фибриногена значимо возросло до 301 мг/дл. 3. Измерения времени образования дублетов эритроцитов в аутологичной плазме, проведенные с помощью двухканального лазерного пинцета, показали значительное различие между временем агрегации в крови здорового донора (T = 13 ± 3.3 сек, N = 20) и в крови пациента, страдающего диабетом 2-го типа: (T = 5.7 ± 1.4 сек, N = 7). Эти результаты также свидетельствует о ускоренной агрегации эритроцитов при диабете. 4. Корреляционный анализ полученных результатов показал, что имеет место связь между степенью выраженности гиперагрегационного синдрома с силами взаимодействия между эритроцитами в отдельных агрегатах в крови крыс и людей, а также с другими показателями крови, характеризующими данные заболевания, в частности, деформируемостью эритроцитов под действием сдвиговых напряжений и содержанием высокомолекулярных белков, например, фибриногена в плазме крови. Повышенное содержание последнего проявляется в повышении вязкости цельной крови. 5. Наличие у пациентов артериальной гипертензии в качестве заболевания, сопутствующего СД, которое само по себе сказывается на микрореологических параметроах крови, делает корреляционные соотношения менее явными. Поэтому исследование «чистых» эффектов (без сопутствующих заболеваний) на экспериментальных животных позволяет упростить корреляционный анализ. Окончательные выводы этого анализа будут сделаны на следующем этапе после набора большей статистики. |
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".