ИСТИНА

Проект направлен на разработку противовирусных вагинальных микробицидов - средств местного применения, предотвращающих передачу вирусных инфекций половым путем. Планируется создание микробицидов на основе нескольких новых ингибиторов основных ферментов ВИЧ-1, обратной транскриптазы и интегразы, разработанных российскими учеными. Для улучшения фармакокинетических показателей этих ингибиторов планируется получить их композицию с серией привитых сополимеров на основе полиэтиленгликоля, разработанных американскими участниками проекта.

1. Для получения композиций с сополимерами отобраны и синтезированы четыре производных 1-[2-(2-бензоилфенокси)этил]-урацила с различным набором заместителей (Рис. 1), которые оказались эффективными ненуклеозидными ингибиторами обратной транскриптазы ВИЧ-1 (ОТ) дикого типа и ее лекарственно-устойчивых форм. Также дополнительно синтезировано соединение Z107, которое эффективно ингибировало ОТ дикого типа. Синтез всех соединений был проведен в соответствии с методиками (Рис. 2), разработанными нами ранее (Novikov M.S. et al. Bioorg. Med. Chem. 2011 .19(19):5794-5802). 2. Получены водорастворимые композиции сополимеров метоксиполиэтиленгликоля и полилизина (MPEG-gPLL) с повышенной гидрофобностью (PGC-based hydrophobic core (HC-PGC)) с пятью синтезированными ингибиторами ОТ. Концентрация ингибитора в полученной композиции составила в среднем 5% (0.5 мг/мл ингибитора и 10 мг/мл HC-PGC). Композиции были охарактеризованы американскими участниками проекта, и было показано, что они образуют в водной среде частицы с размером 260-290 нм, устойчивые в течение, по крайней мере, 6 месяцев. 3. Проверена способность полученных композиций подавлять активность ОТ дикого типа и ее лекарственно-устойчивых мутантных форм. Проверялось влияние на ДНК-зависимую ДНК-полимеразную активность ОТ. Показано, что полимер в составе композиций не оказывает заметного влияния на ингибирование ОТ дикого типа производными 1-[2-(2-бензоилфенокси)этил]-урацила: для всех ингибиторов, кроме Z007, определено сравнимое IC50 для композиций с полимером и растворов ингибиторов в диметилсульфоксиде (ДМСО) (Табл. 1). Сам полимер не проявлял ингибирующего действия. При проверке ингибирования мутантных форм ОТ оказалось, что наиболее перспективна композиция с ингибитором Z107, поскольку она была активна по отношению к ОТ с мутациями G190A, Y181C и K103N+Y181C, обеспечивающими устойчивость к невирапину – одному из основных компонентов антиретровирусной терапии. Эта композиция была отобрана для проверки анти-вирусной активности в культурах инфицированных клеток. 4. Получены композиции положительно-заряженных полимеров с ранее охарактеризованным нами олигонуклеотидным ингибитором интегразы 2’-О-метил-GGUUUUUGUGU-HEX (11-ОМ-НЕХ) (Agapkina J. et al. ACS Med Chem Lett. 2011; 2(7):532-537). Американскими коллегами было получено два аргинин-содержащих полимера на основе сополимера метоксиполиэтиленгликоля и полилизина (MPEG-gPLL), отличающихся массой полиэтиленгликоля, MPEG2-g-PLL and MPEG5-g-PLL (Рис. 3), которые были дополнительно помечены Alexa Fluor 488. Исследование образования композиций этих полимеров с ингибитором показало, что более эффективно образуется композиция с MPEG2-g-pHA: соотношение олигонуклеотид/полимер составило 2 μg/5μg в случае MPEG2-g-pHA и 0.5μg/5μg в случае MPEG5-g-pHA. Начато исследование транспорта в клетки композиции 11-ОМ-НЕХ/ MPEG2-g-pHA. Проверка анти-вирусной активности в культурах инфицированных клеток будет проводиться американскими коллегами с использованием обеих композиций. 5. Впервые получены и охарактеризованы препараты интегразы ВИЧ-1 субтипа А штамма FSU-A, доминирующего на территории России, содержащие первичные мутации лекарственной устойчивости G118R и Q148K и вторичные компенсаторные замены E138K и G140S, и проведено их сравнение с соответствующими мутантными формами интегразы ВИЧ-1 субтипа В штамма HXB-2. Сделан вывод о том, что можно ожидать закрепления лекарственно устойчивых вариантов FSU-A, несущих первичную мутацию Q148K и компенсаторные мутации E138K и/или G140S, в то время как появление лекарственно устойчивых вариантов FSU-A с заменой G118R представляется маловероятным. Показано, что олигонуклеотидный ингибитор 11-ОМ-НЕХ эффективно ингибирует все исследованные мутантные формы интегразы штамма FSU-A.