ИСТИНА

Создание методами генетической инженерии модельных белков для разработки методологии оценки функциональной активности единичных объектов; оценка ландшафта внутриклеточных мишеней белковой природы и нацеленных на них антивозрастных и потенциальных геропротективных соединений, для выявления наиболее перспективных мишеней и агентов; определение возможности разработки системы оценки биологического возраста на основе анализа состава внеклеточной ДНК плазмы крови

Creation of model proteins by genetic engineering methods to develop a methodology for assessing the functional activity of single objects; assessment of the landscape of intracellular protein targets and anti-aging and potential geroprotective compounds targeting them, to identify the most promising targets and agents; determination of the possibility of developing a system for assessing biological age on the basis of analysing the composition of extracellular DNA of blood plasma.

Ранее в коллективе-заявителе была создана и оптимизирована 3D модель полноразмерной структуры ФДГ из Pseudomonas sp.101, выбраны замены аминокислотных остатков на C-конце ФДГ для повышения стабильности. Созданы генно-инженерные конструкции, получены препараты ферментов и сделан анализ их кинетических свойств. Создана генно-инженерная конструкция, кодирующая гибридный цитохром Р450 ВМ3 с ФДГ, получен препарат фермента, и сделан анализ его стабильности. Для отбора мишеней с целью коррекции процессов старения получен набор данных о внутриклеточных мишенях белковой природы и нацеленных на них известных антивозрастных агентах. На основе анализа набора мишеней, отобрана мишень для коррекции процессов старения, пригодная для молекулярного моделирования, построены полноатомные 3Д модели фермента и его комплексов с набором лигандов. Для всех моделей сделан расчет молекулярно-динамической траектории. Оценена возможность и обоснованность создания «молекулярных часов» старения на основе анализа фрагментома и эпигенетического ландшафта внеклеточной ДНК. Разработан протокол пробоподготовки модельной ДНК для нанопорового секвенирования без амплификации ДНК и подобран алгоритм анализа данных. Подтверждена возможность изучения фрагментома вкДНК путем нанопорового секвенирования. Проведено нанопоровое секвенирование модельной фрагментированной геномной ДНК, сделан анализ полученных данных, выявлены модифицированные основания.