«Разработка чувствительных иммуноферментных методов определения бета-агонистов с применением тройного ковалентного конъюгата наночастиц золота с антителами и пероксидазой хрена с повышенным соотношением фермент/антителоНИР

Development of ultra-sensitive enzyme immunochemical assays of B-agonists using ternary covalent conjugate of gold nanoparticles with antibody and horseradish peroxidase with an improved ratio enzyme/antibody

Соисполнители НИР

Chung Shan Medical University Соисполнитель

Источник финансирования НИР

грант РФФИ

Этапы НИР

# Сроки Название
1 17 марта 2017 г.-3 марта 2018 г. «Разработка чувствительных иммуноферментных методов определения бета-агонистов с применением тройного ковалентного конъюгата наночастиц золота с антителами и пероксидазой хрена с повышенным соотношением фермент/антитело
Результаты этапа: Настоящий проект фокусируется на разработке метода синтеза нового ковалентного антитело-пероксидазного конъюгата с повышенным соотношением фермент/антитело. В течение 2017 года проведены исследования по модификации пероксидазы хрена и различных антител N-гидроксисукцинимидным эфиром S-ацетилтиогликоливой кислоты для введения в структуру белков свободных сульфгидрильных групп. С использованием синтезированных наночастиц золота различного размера получены тройные конъюгаты нааночастиц золота с ковалентно иммобилизованными антителами (против IgG кролика и цитринина) и пероксидазы. Условия синтеза были оптимизированы при варьировании размера используемых наночастиц, степени модификации антител и молярного соотношения пероксидазы и антител в реакционной смеси. Для обоих типов антител получены активные тройные конъюгаты, что позволило успешно применить их в иммуноферментном анализе. Дополнительно для повышения чувствительности методом анализа был использован хемилюминесцентный метод определения пероксидазы с применением фенотиазиновых усилителей. Практическая значимость разработанного метода анализа для определении цитринина была продемонстрирована в образцах красного риса.
2 3 марта 2018 г.-18 марта 2019 г. «Разработка хемилюминесцентных иммуноферментных методов определения бета-агонистов с применением тройного конъюгата
Результаты этапа: В течение 2018 г. были разработаны два формата ИФА для определения салбутамола (САМ), а именно прямой и непрямой конкурентные ИФА. Следует отметить, что непрямой конкурентный ИФА был разработан в сочетании с колориметрической и хемилюминесцентной детекцией, причем последний вариант анализа оказался значительно более чувствительным. В то же время, хотя была проведена большая экспериментальная работа, получить активные тройные конъюгаты (антитела против САМ-золотые наночастицы-ПХ) не удалось. При выяснении причин этого было показано, что в отличие от других антител, используемые нами антитела против САМ инактивируются под действием N-гидроксисукцинимидного эфира S-ацетилтиогликоливой кислоты (ГЭАТ), реагента, используемого для введения сульфгидрильных групп в молекулы антител. Работы по синтезу активных тройных конъюгатов следует продолжить.
3 23 июля 2019 г.-20 июня 2020 г. «Разработка хемилюминесцентных иммуноферментных методов определения бета-агонистов с применением тройного конъюгата
Результаты этапа:

Прикрепленные к НИР результаты

Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".