Результаты этапа: 1. Выполнен обзор современной научно-технической литературы, затрагивающей научно-техническую проблему, исследуемую в рамках НИР, в том числе обзор научных информационных источников: статьи в ведущих зарубежных и/или российских научных журналах и (или) патенты за период 2010-2015 гг.
2. В ходе выполнения НИР получен ген нового анионного (хлорного) канального родопсина GtACR2. Рекомбинантный ген был встроен по соответствующим сайтам рестрикции в экспрессионный вектор, позволяющий производить трансфекцию нейрональных клеток. Получены экспрессионные плазмидные векторы, содержащие гены катионного ChR2 и анионного GtACR2 канальных родопсинов под контролем специальных якорных последовательностей (мотивов), обеспечивающих локализованную экспрессию обоих канальных родопсинов в нейронах. В качестве якорных использованы такие последовательности, как мотивы анкерина и/или Kv2.1, обеспечивающие соматическую локализацию ChR2, и мотивы PSD95 и/или нейролигина, обеспечивающие периферическую локализацию GtACR2.
3.Определена нуклеотидная последовательность генов канальных родопсинов ChR2 и GtACR2 в составе плазмидных векторов методом ДНК-секвенирования по двум цепям.
4. Отработаны методы трансфекции экспрессионными векторами первичных диссоциированных нейрональных культур, а также методы их последующего электрофизиологического и морфологического анализа.
5. Отработаны методы изучения особенностей возбуждающего и тормозного рецепторных полей нейрональной клетки при помощи световой стимуляции с одновременной внутриклеточной регистрацией активности клетки.
6. Изучены эффективность локализованной трансфекции канальными родопсинами нейрональных клеток и физиологическая активность нейронов, в том числе, их возбуждающего и тормозного рецепторных полей, с помощью электрофизиологических методов.
|