ИСТИНА

Целью настоящего проекта является исследование активности сигнального каскада Hippo во время массовой гибели оогоний/ооцитов, протекающей во время эмбрионального развития организма, так называемой первой волны гибели. В настоящее время отсутствует информация о факторах, которые могут быть ключевыми при селекции оогоний/ооцитов и разделении общей популяции этих клеток на гибнущие и формирующие примордиальные фолликулы. Мы предполагаем, что активность сигнального каскада Hippo может быть таким фактором.

В результате выполнения проекта впервые будут получены данные об экспрессии генов MST1/2, LATS1/2 и YAP - участников сигнального каскада Hippo в развивающихся эмбриональных яичниках мыши (Е14,5 – Е19,5). Мы ожидаем, что пик экспрессии исследуемых генов будет наблюдаться на 16,5-17,5 сутки эмбрионального развития, когда происходит разрушение цист и начинается активное сокращение количества ооцитов. Также будут выявлены соответствующие белки и их локализация в развивающихся яичниках. Важно отметить, что будут проанализированы не только половые клетки, но и соматические клетки, так как их взаимодействие является одним из ключевых моментов нормального оо- и фолликулогенеза. Мы ожидаем увидеть цитоплазматическую локализацию MST1/2 и LATS1/2 и ядерную локализацию YAP. Выявление маркеров апоптоза в эмбриональных яичниках и их возможная колоколизация в клетках с участниками сигнального каскада Hippo, позволит предположить, что активация сигнального каскада Hippo лежит в основе процесса селекции половых клеток на ранних этапах оогенеза. В ходе дальнейших этапов выполнения проекта будет проверена гипотеза об участии сигнального каскада Hippo в регуляции гибели половых клеток, имеющей место во время эмбрионального развития организма. В результате ингибирования сигнального пути Hippo на уровне активности киназ MST1/2 и транскрипционного коактиватора YAP будут получены данные о состоянии соматических клеток, количестве и состоянии половых клеток. Будет проведено сравнение активности апоптотических процессов в нормальном яичнике и яичнике с неактивным Hippo. Мы ожидаем, что в контрольной и экспериментальной группе количество половых клеток и овариальных цист будет существенно различаться. Данные, которые будут получены в результате реализации проекта, существенно дополнят и уточнят функции сигнального каскада Hippo в процессах оогенеза. Помимо фундаментального значения – расширения знаний о регуляции сложного процесса формирования женских половых клеток, у проекта есть и прикладное значение. Полученные данные позволят создать новые и оптимизировать существующие системы культивирования, как овариальных фолликулов, так и фрагментов овариальной ткани с целью получения ооцитов, компетентных к оплодотворению и дальнейшему развитию. Такие работы ведутся на протяжении последних 10 лет очень активно, так как проблема сохранения овариального резерва, преодоления вторичного бесплодия и сохранения/восстановления фертильности онкологических больных, не достигших периода полового созревания, равно как и пациенток детородного возраста становится все более актуальной.

Отработаны подходы к работе с эмбриональным материалом: получение датированной беременности, выделение яичников из эмбрионов мышей различного возраста (Е 14,5 - Е 19,5), подобраны условия культивирования эмбриональных яичников. Получены пилотные данные об уровнях экспрессии исследуемых генов, кодирующих белки участников сигнального каскада Hippo, в яичниках мышей (Е14,5-17,5).