ИСТИНА

Целью проекта является идентификация и исследование новых генов, регулирующих деление клеток цианобактерий. Основными задачами проекта являются: (1) Проведение транспозонного мутагенеза цианобактерии Synechococcus PCC 7942 c целью выделения мутантов, характеризующихся нарушениями клеточного деления. (2) Идентификация новых генов, ответственных за деление клетки, с использованием полученных транспозонных мутантов. (3) Изучение экспрессии хорошо изученных бактериальных генов ftsZ и ftsA, ответственных за формирование клеточной перетяжки (септы), в клетках новых филаментозных мутантов Synechococcus PCC 7942 Ftn2 и Ftn6 с целью установления функциональной зависимости между этими известными бактериальными (ftsZ, ftsA) и новыми (ftn2, ftn6) генами. Для решения первой из поставленных задач нами будет проведен транспозонный мутагенез клеток дикого типа одноклеточной цианобактерии Synechococcus PCC 7942. Для этого будет использован новый высоко эффективный для данной цианобактерии транспозон Tn-692. Мутанты будут отбираться на агаризованной среде BG-11 в присутствие антибиотиков (спектиномицина и эритромицина) как расползающиеся колонии с неровными краями. Использование световой микроскопии позволит подтвердить наличие неделящихся (длинных, филаментозных) клеток, составляющих такие колонии. Для решения второй задачи - идентификации новых генов, будут использованы экспериментальные методы молекулярной генетики, такие, как выделение геномной ДНК из мутантов, рестрикция, лигирование, полимеразная цепная реакция, секвенирование, а также методы компьютерного анализа. Компьютерный анализ будет использован для характеризации найденных генов и кодируемых ими белков. Для решения третьей задачи будет использован метод анализа экспрессии РНК с помощью РНК-ДНК гибридизации. Будет проведен анализ экспрессии генов ftsZ и ftsA в клетках Ftn2 и Ftn6 цианобактерии Synechococcus sp. PCC 7942. Это необходимо для выяснения роли генов ftn2, ftn6 в регуляции генов, ответственных за формирование септы в клетках цианобактерий.