Результаты этапа: Получены рекомбинантные белки HP1a, HP1b, HP1c. Проведен гель-шифт анализ связывания белка HP1a с регуляторными областями ретротранспозонов группы gypsy (17,6, rover, gypsy, Springer, Tirant и ZAM). Проведены скрещивания между линиями с фенотипом flamenco и линией дикого типа. На полученных гибридах проведен анализ экспрессии элемента gypsy. |
Результаты этапа: Работа посвящена исследованию механизмов влияния гетерохроматиновых белков семейства HP1 на транспозиционную активность ретротранспозонов группы gypsy у Drosophila melanogaster. В ходе исследования нами были получены рекоминантные белки семейства HP1 (HP1a, HP1b, HP1c, HP1d и HP1e). Исследовано in vitro взаимодействие рекомбинантных белков-паралогов HP1a, HP1b и HP1c с 5'-нетранслируемыми регуляторными областями ретротранспозонов группы gypsy у Drosophila melanogaster: gypsy, Springer, Tirant, ZAM, Rover и 17.6. С использованием конкурентной ДНК подобраны условия, позволяющие добиться специфичного связывания с матрицей. Показано, что белки HP1a, HP1b и HP1c эффективно связываются с 5'-нетранслируемой областью ретротранспозонов, имеющих в ее составе тандемные повторы. Обнаружено, что повторы абсолютно необходимы для связывания белка HP1a с 5'- нетранслируемой областью мобильных генетических элементов Tirant и ZAM. Отсутствие повторов в случае элемента ZAM или их число менее двух – в случае Tirant делает невозможным такое взаимодействие. Таким образом, наличие тандемных повторов в 5'-нетранслируемой области ретротранспозонов группы gypsy является важным инструментом регуляции их транспозиции гетерохроматиновыми белками.
Исследована экспрессия 10 ДКП-ретроэлементов, принадлежащих трём различным группам: gypsy (tirant, 297, rover, springer gypsy), bell (roo, aurora), copia (copia, frogger) и ретроэлемента Opus в линиях с фенотипом flamenco и линии дикого типа.
Установлено, что анализ уровней транскрипции ретротранспозонов gypsy, tirant, rover, opus и гена ctcf в совокупности позволяет различить линии с фенотипом flamenco- и flamenco+. |