| Результаты этапа: Выявлено связывание с аффинным сорбентом, имеющим в качестве лиганда тиамин, глутаматдегидрогеназы и малатдегидрогеназы - протеинов ранее не известных как тиаминзависимые. In vitro показано разнонаправленное влияние тиамина и тиаминдифосфата на активности малат- и глутаматдегидрогеназы в исходных препаратах, подаваемых на АС, и тех же энзимов, связавшихся с аффинным сорбентом, что предполагает существование различных изоформ МДГ и ГДГ. Подводя итоги выполнения проекта можно сказать, что план исследований выполнен практически в полном объёме: опробованы различные условия связывания, элюции и концентрирования протеинов, с помощью АC выделены белки не только из мозга крысы, но и из мозга быка, которые были исследованы электрофоретическими, масс-спектрометрическими (результаты будут получены позже поскольку гели после ПААГ-ДСН электрофореза для МС-идентификации переданы нашим партнерам в Германию) и энзимологическими методами, обнаружено наличие эффекта тиамина и его дифосфатного производного в определённых предварительными экспериментами дозах на некоторые из элюированных с АС энзимы. Освоены методы множественных выравниваний белковых последовательностей и биоинформатического анализа протеома с помощью доступных из интернета программ, таких как DAVID, STRING, BLAST. Эти методы будут применяться к списку идентифицированных МС белков фракций, полученных в ходе выполнения проекта. Тиамин в высоких дозах уже сейчас используется в терапии нейродегенеративных патологий и данное направление исследований является перспективным в поиске мишеней терапевтического воздействия и разработке новых подходов в лечении таких заболеваний как синдром Корсакова-Вернике, болезнь Альцгеймера и другие. |
