Пространственная и временная регуляция биосинтеза белка в клетках млекопитающихНИР

Spatial and temporal control of protein biosynthesis in mammalian cells

Источник финансирования НИР

грант РНФ

Этапы НИР

# Сроки Название
1 28 марта 2018 г.-15 декабря 2018 г. Пространственная и временная регуляция биосинтеза белка в клетках млекопитающих
Результаты этапа: В первый год выполнения проекта была проведена подготовительная работа и получены первые результаты. Была полностью отлажена методика рибосомного профайлинга печени и почки мыши: от изготовления библиотек до бионформатического анализа и визуализации данных (включая картирование, анализ дифференциальной экспрессии, построение метагенных профилей и т.п.) Разработана методика доставки репортёрных мРНК в печень живых мышей и отлажен метод наблюдения за экспрессией трансфицированной мРНК в режиме реального времени, получены результаты по анализу экспрессии сплайсирующихся транскриптов. Получены стабильные клеточные линии клеток человека, экспрессирующие зелёный флуоресцентный белок, слитый с РНК-связывающим белком MS2CP, и подготовлены конструкции, кодирующие варианты люциферазных мРНК с MS2-шпильками в 3’ НТО. Обнаружены новые случаи тканеспецифичной экспрессии генов, кодирующих компоненты трансляционного аппарата. Выявлен новый механизм мРНК-специфичной регуляции трансляции на основе uORF, приводящий к резкому падению уровня трансляции как минимум двух мРНК (MDM2, EIF2D) в условиях гиперосмотического стресса. В совместной работе с лаб. Томаса Стайтца (Йельский университет, США) определена структура интерфейса взаимодействующих факторов рибосомного рециклинга и реинициации трансляции MCT-1 и DENR в гетеродимере.
2 1 января 2019 г.-15 декабря 2019 г. Второй этап
Результаты этапа: В 2019 году в ходе реализации проекта было показано, что мРНК, содержащая IRES-элемент вируса CrPV, несмотря на свою эффективную трансляцию в условиях классического арсенитного стресса, тем не менее обнаруживается в стресс-гранулах. Антибиотики, способствующие разборке полисом до состояния, когда на мРНК находится в основном по одной-единственной 80S рибосоме в районе стартового кодона, делают невозможным формирование стресс-гранул в клетке под действием классического стрессирующего агента арсенита натрия. Показана релокализация факторов терминации трансляции eRF1 и eRF3, а также факторов реинициации и рибосомного рециклинга eIF2D, MCT-1, DENR и ABCE1 в стресс-гранулы в условиях классического арсенитного стресса. В этих же условиях в клетке резко возрастает эффективность реинициации и частота сквозного прочтения стоп-кодонов. Анализ данных рибосомного профайлинга штаммов дрожжей, нокаутных по генам факторов рециклинга и реинициации eIF2D и MCT-1 (ТМА64 и ТМА20, соответственно), выявил нарушения в трансляции uORF-содержащих мРНК, а также привёл к обнаружению неизвестного ранее артефакта, потенциально затрагивающего сотни генов в библиотеке нокаутных дрожжевых штаммов. В результате обработки данных рибосомного профайлинга печени и почки мыши выявлены мРНК, предположительно демонстрирующие тканеспецифичную трансляцию.
3 1 января 2020 г.-15 декабря 2020 г. Третий этап
Результаты этапа:

Прикрепленные к НИР результаты

Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".