ИСТИНА

Острые нарушения мозгового кровообращения по геморрагическому типу составляют около 15% всех инсультов, и ежегодно в России регистрируют более 40 000 кровоизлияний в мозг. Образовавшаяся в результате кровоизлияния гематома сдавливает окружающие ткани и сосуды, нарушает трофику нервной ткани. Продукты распада эритроцитов и высокая концентрация глутамата оказывают токсическое действие на нейроны в зоне повреждения, а фибрин повреждает нервные волокна и препятствует их восстановлению, способствует развитию воспаления и фиброза. Все это приводит к массовой гибели нейронов и клеток-сателлитов и формированию в области кровоизлияния кисты или рубца. Действенных терапевтических подходов для уменьшения области повреждения при внутримозговом кровоизлиянии и для стимуляции восстановления поврежденного мозга на сегодняшний день не существует. Поэтому данный проект направлен на поиск способов борьбы с последствиями геморрагических инсультов. Исходя из патогенеза развития заболевания, одними из наиболее перспективных препаратов для снижения объемов повреждения при геморрагическом инсульте могут быть нейротрофический фактор и/или активатор плазминогена. В неблагоприятных условиях в очаге поражения нейротрофический фактор способствовал бы лучшему выживанию поврежденных нейронов, а активатор плазминогена, запуская разрушение фибрина, сделал бы возможным восстановление нервных связей. Для стимуляции выживания поврежденных нейронов может быть использован мозговой нейротрофический фактор (BDNF), который является одним из ключевых факторов роста для поддержания функционирования мозговых структур и процесса обучения. А для скорейшего очищения очага кровоизлияния от отложений фибрина может быть использован урокиназный активатор плазминогена (uPA). Однако локальное или системное введение белков в терапевтических целях при геморрагическом инсульте малоэффективно по причине их низкой стабильности. Альтернативой может служить введение генетической конструкции, кодирующей необходимые белки. Поэтому в данном исследовании мы планируем изучить нейропротекторные свойства сочетанного воздействия мозгового нейротрофического фактора и урокиназного активатора плазминогена на восстановление функций центральной нервной системы после геморрагического инсульта.

Acute disorders of cerebral circulation of the hemorrhagic type take about 15% of all strokes, and annually in Russia more than 40,000 hemorrhages in the brain are recorded. The fibrin clot formed as a result of hemorrhage compresses the surrounding tissues and blood vessels, disrupts the nutrition of nervous tissue. Decay products of erythrocytes and high concentration of glutamate exert a toxic effect on neurons in the area of ​​damage, and fibrin damages nerve fibers, prevents their recovery and contributes to the development of inflammation and fibrosis. All this leads to mass death of neurons and satellite cells and the formation of a cyst or glial scar in the hemorrhage region. Effective therapeutic approaches to reduce the area of ​​damage with intracerebral hemorrhage and to stimulate the recovery of the damaged brain today don't exist. Therefore, this project is aimed at finding ways to deal with the consequences of hemorrhagic strokes. Based on the pathogenesis of the development of the disease, the most promising protein factors for reducing the volume of damage in hemorrhagic stroke may be a neurotrophic factor and / or a plasminogen activator. In unfavorable conditions in the lesion area, the neurotrophic factor would promote better survival of damaged neurons, and the plasminogen activator, triggering the destruction of fibrin, would make it possible to restore the neural connections. To stimulate the survival of damaged neurons we offer brain neurotrophic factor (BDNF), which is one of the key growth factors for maintaining the functioning of brain structures and the learning process. And urokinase plasminogen activator (uPA) can be used for cleansing the hemorrhage focus from fibrin deposits. However, local or systemic administration of proteins for therapeutic purposes after hemorrhagic stroke is ineffective due to their low stability. An alternative is the introduction of a genetic construct encoding the necessary proteins. Therefore, in this study, we plan to investigate the neurotrophic activity of both BDNF and uPA on restoration of the central nervous system after hemorrhagic stroke.

В первый год реализации Проекта будет налажена модель геморрагического инсульта на крысах, которая включает в себя непосредственно индукцию внутримозгового кровоизлияния и комплекс методов оценки восстановления мозга после инсульта: гистологические и иммуногистохимические методы, а также методы оценки выживаемости и восстановления функциональной активности поврежденного мозга. Также в первый год Проекта будут получены данные об уровне экспрессии в интактном и в поврежденном мозгу рекомбинантных контрольных белков (b-галактозидаза и GFP) и белков, потенциально обладающих терапевтической активностью (мозговой нейротрофический фактор и урокиназный активатор плазминогена), после инъекции в мозг генно-инженерных плазмидных конструкций. На втором году реализации Проекта будут получены результаты о влиянии генно-терапевтического плазмидного препарата, кодирующего мозговой нейротрофический фактор и урокиназный активатор плазминогена, на объем повреждения мозга и состояние нейронов в периинсультной зоне, а также на показатель выживаемости и восстановление поведенческой активности экспериментальных животных. В случае выраженной терапевтической активности исследованного плазмидного препарата, кодирующего мозговой нейротрофический фактор и урокиназный активатор плазминогена, на третьем году реализации Проекта планируется подобрать оптимальные дозы и временной режим введения генно-терапевтического препарата, а также установить оптимальные области головного мозга (зона кровоизлияния, периинсультная зона, перивентрикулярная зона), введение препарата в которые обеспечивает максимальный терапевтический эффект. В течение второго и третьего годов реализации Проекта запланирована публикация полученных результатов в виде научных статей и патентов, а также презентация полученных данных на конференциях.

У коллектива есть опыт: 1. в работе c in vivo моделями регенерации нервной ткани: модели инсульта и регенерации периферического нерва, 2. в создании и использовании эффективных генно-инженерных конструкций, обеспечивающих продукцию факторов роста и др. рекомбинантных белков, 3. в обеспечении эффективной продукции белков после простой инъекции в мышцу, 4. в обнаружении рекомбинантных белков гистологическими, иммуногистохимическими и биохимическими методами, 5. в анализе гистологических срезов головного мозга. У коллектива есть три патента на применение генно-инженерных конструкций, кодирующих мозговой нейротрофический фактор и урокиназный активатор плазминогена, для стимуляции восстановления периферической нервной системы после травмы. Созданная коллективом генно-инженерная конструкция, кодирующая BDNF, (Иннервин) прошла 2-ю стадию клинических испытаний.