ИСТИНА

1. Впервые продемонстрирована способность 6S-1 и 6S-2 РНК B. subtilis ингибировать in vitro транскрипцию с модельных промоторов генов rrnB, rrnO, veg, tuf, argC, appD и cspB B. subtilis и С2 фага φ29. Установлено, что обе 6S РНК проявляют сравнимую эффективность ингибирования транскрипции вне зависимости от нуклеотидных последовательностей промоторных элементов выбранных генов и природы стартового нуклеотида. 2. Разработана методика выделения холофермента РНК-полимеразы (РНКП) B. subtilis, показано его специфическое взаимодействие как с 6S-1, так и с 6S-2 РНК B. subtilis. Константы диссоциации комплексов 6S-1 РНК:РНКП и 6S 2 РНК:РНКП имеют сопоставимые значения. 3. Впервые продемонстрирован in vitro синтез коротких фрагментов РНК (пРНК) на 6S-1 и 6S-2 РНК B. subtilis в качестве матриц для транскрипции и определены их нуклеотидные последовательности. Длина преобладающих пРНК-транскриптов составляет 14 н.о. для пРНК6S-1 и 13-16 н.о. для пРНК6S-2. В случае 6S 2 РНК возможен синтез длинных транскриптов до 26 н.о., эффективность которого прямо пропорциональна концентрации аденозинтрифосфата. 4. Установлено, что и пРНК6S-1, и пРНК6S-2 формируют РНК-РНК дуплексы с 6S 1 и 6S-2 РНК, соответственно. Показано, что 14-звенная пРНК6S-1 образует стабильный комплекс с 6S-1 РНК и блокирует доступ к ней РНК-полимеразы. В случае 6S-2 РНК сравнимая стабильность комплекса с пРНК6S-2 наблюдается только для 20-звенных транскриптов. 5. Впервые показано, что делеции генов bsrA и bsrB, кодирующих 6S-1 и 6S-2 РНК, влияют на экспрессию белков в клетках B. subtilis. Установлено, что ингибирование экспрессии белков AhpC, KatA, Mdh, MntA, RplJ, SufC, TpiA и YvyD может быть вызвано влиянием как 6S-1, так и 6S 2 РНК. Снижение уровня экспрессии белков AcoB, GapA и PyrG связано с присутствием в клетке 6S 2 РНК. Идентифицированные белки участвуют в процессах метаболизма, в частности, в условиях окислительного стресса, аминокислотного голодания и холодового шока.