ИСТИНА

1. Создан биобанк образцов глиальных опухолей пациентов ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, который позволил валидировать отобранные в ходе биоинформационного анализа на базе данных TCGA маркеры астроцитом (GII, GIII) и глиобластом (GIV), при этом выявлены существенные различия в транскрипционной активности опухоли относительно условно здоровой ткани, а именно: – для группы диффузной астроцитомы (GII) достоверное изменение относительной экспрессии отмечено для гена KDM1A (медиана 2dCt=1,49; p=0,00572) с частотой встречаемости высокого уровня экспрессии у 73% пациентов; – в группе анапластических астроцитом (GIII) достоверное повышение относительной экспрессии в опухолевой ткани отмечено для гена HIF1A (медиана 2dCt=1,39, p=0,012367) с частотой 73% случаев; – в группе глиобластом (GIV) статистически значимые отличия относительной экспрессии зафиксированы для генов HBP1 (медиана 2dCt=0,728470; p=0,003264), HIF1A (медиана 2dCt=1,546421; p=0,007612), EGLN1 (медиана 2dCt=0,714268; p=0,001623), EGLN3 (медиана 2dCt=0,517692; p=0,004231), EGFR (медиана 2dCt=1,836822; p=0,021324), SMAD4 (медиана 2dCt=0,838454; p=0,016534), SMAD7 (медиана 2dCt=0,390712; p=0,000003). 2. Достоверно доказано, что изменения экспрессии ряда генов являются прогностическими показателями глиальных опухолей высокой степени злокачественности: – в группе диффузных астроцитом (GII) низкая экспрессия KDM1A ассоциирована с увеличением продолжительности жизни (медиана 475 дней (211–638) vs 298,5 дня (149–564); p=0,0022); – у пациентов с анапластической астроцитомой (GIII) уровень HIF1A отрицательно коррелировал с общей выживаемостью (медиана – 639 (156–704) дней vs 156 (37–231) дней; p=0,049); – в группе глиобластом (GIV) сниженная экспрессия EGFR и HIF1A ассоциирована с увеличением продолжительности жизни соответственно, медиана – 340 (87–497) дней vs 220 (134–470) дней, p=0,045 и – 409 (140–517) дней vs 317 (130–503) дней, p=0,0081; и напротив, повышение экспрессии HBP1, EGLN1, EGLN3 – с увеличением продолжительности жизни соответственно – 263 (85–506) дней vs 358 (128–499) дней, p=0,0058, и 340 (199–629) дней vs 480 (285–644) дней, p=0,00037 и медиана – 289,5 (157,5–573) дней vs 455,5 (217,5–628,5) дней, p=0,00023. 3. Сравнение транскрипционных профилей диффузных (GII) и анапластических астроцитом (GIII) и глиобластом (GIV) позволило дискриминировать глиомы GII и глиомы высокой степени злокачественности: для астроцитом (GII) характерно повышение экспрессии гена KDM1A (p=0,00572) и понижение экспрессии гена SMAD7, тогда как в глиомах (GIII, GIV) имеет место аберрантный уровень экспрессии генов EGFR, HIF1A и SMAD4/7 (p<0,01), что предполагает потенциально высокое терапевтическое значение анти-EGFR, анти-HIF1A и анти-TGF-B препаратов. 4. Для генов, продемонстрировавших дифференциальную экспрессию в глиомах, был идентифицирован пул таргетирующих их микроРНК, которые в той же выборке глиальных опухолей обладали либо статистически значимой повышенной транскрипционной активностью (hsa-miR-155-5p, hsa-miR-21-5p, hsa-miR-497-5p, hsa-miR-146a-5p, hsa-miR-92a-1-5p), либо пониженным уровнем экспрессии (hsa-miR-155-5p и hsa-miR-21-5p), что может быть перспективно для разработки новых терапевтических подходов в лечении глиом высокой степени злокачественности. 5. На основании полученных транскрипционных паттернов и последующего интерактомного анализа взаимодействия микроРНК и мРНК генов, ассоциированных с выживаемостью, были отобраны маркеры, перспективные в качестве мишеней таргетной и генной терапии, в том числе 15 генов (HIF1A, HBP, EGLN1, EGLN3, EGFR, KDM1B, KDM1A, NOTCH1, NOTCH2, MSI1, MSI2, SMAD4, SMAD7, SMO, TET1) и 13 микроРНК (miR-215-5p, miR-122-5p, miR-146a-; miR-326, miR-497-5p, miR-92a-1-5p, miR-107, miR-22-3, miR-34a-5p, miR-324-5p, miR-330-3p, miR-155-5p и miR-21-5p). 6. В тканях глиальных опухолей высокой степени злокачественности и их перифокальных зонах достоверно (р<0,01) выше содержание VEGF-А (16974,5±12051 и 6850,8±436,1) TGF-β1 (4095,4±313,8 и 3931,7±324,2). В тканях глиальных опухолей высокой степени злокачественности и их перифокальных зонах сильная положительная корреляционная связь уровня VEGF-А прослеживалась с содержанием EGF, IGF-I, IGF-II и TGF-β1. 7. В тканях глиальных опухолей высокой степени злокачественности содержание обеих форм ингибиторов активаторов плазминогена (PAI-1-АГ – 509,5±38,3 нг/г тк и PAI-1-акт – 21,44±1,6 ед/г тк) по сравнению с их перифокальными зонами (230,4±17,6 нг/г тк и 8,90±0,7 ед/г тк) содержится достоверно (р<0,05) более высокое количество, что позволяет считать эти белки опухоль-ассоциированными. Расчетный коэффициент соотношений проурокиназы (uPA-АГ)/ урокиназа (uPA-акт) в неизмененной перифокальной зоне оболочечной опухоли составлял 70,9±5,4, по сравнению с перифокальной зоной глиомы 297±22,3, а в опухоли 172±13,1 (р<0,05), что доказывает непосредственное участие сериновой протеиназы и ее ингибитора PAI-1 в метаболизме злокачественных глиом. 8. Разработана многоэтапная PDX-модель глиом высокой степени злокачественности, включающая ортотопическую трансплантацию фрагментов ткани глиом иммунодефицитным мышам с последующими пассажами и подкожной перевивкой, на которой показан синергический эффект бортезомиба с темозоломидом в виде уменьшения объема опухоли в 6,8 раза по сравнению с контролем: среднее значение объемов ксенографтов контрольной группы составило 1746,3±64,3 мм3, что было статистически значимо больше средних значений объемов ксенографтов группы мышей, получавших темозоломид (745,3±57,3 мм3), бортезомиб (644,27±67,3 мм3) и комбинацию этих препаратов 255,3±30,3 мм3). Получены статистически значимые различия между экспериментальной группой с комбинацией препаратов и контрольной по критерию Манна – Уитни (p<0,001). ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 1. Рекомендуем использовать разработанную оригинальную тест-систему по выявлению специфичного паттерна микроРНК в плазме крови для неинвазивной диагностики глиальных опухолей высокой степени злокачественности (специфичность – 71,2% и чувствительность – 100%; площадь под ROC-кривой – 88,5%) и для их дифференцировки с метастатическими поражениями головного мозга (специфичность – 61,1% и чувствительность – 100%, площадь под ROC-кривой – 82%). 2. Рекомендуем использовать разработанный оригинальный способ дифференциальной диагностики (первичной глиальной) доброкачественной и злокачественной опухоли головного мозга, заключающийся в определении величины активности трипсиноподобных протеиназ плазмы крови. Значение АТП от 1228,6 мЕ/мл до 1443,4 свидетельствует о том, что новообразование является первичным злокачественным. 3. Для определения прогноза течения первичных злокачественных опухолей головного мозга рекомендуем учитывать изменение экспрессии следующих маркеров, которые коррелируют с общей выживаемостью: – в группе диффузных астроцитом экспрессия KDM1A; – у пациентов с анапластической астроцитомой уровень HIF1A; – в группе глиальных опухолей высокой степени злокачественности экспрессия EGFR, HIF1A, HBP1, EGLN1, EGLN3. 4. Для испытания новых фармакологических субстанций рекомендуем использовать PDX-модели глиобластом человека на иммунодефицитных мышах, первый пассаж которых получен в результате ортотопической трансплантации по разработанному нами методу. 5. Для профилактики инфекционных осложнений, связанных с послеоперационной раной, включая раневую ликворею, предлагаем использовать разработанный нами способ закрытия костного дефекта после выполнения стереотаксических вмешательств на головном мозге, заключающийся в использовании композиции их фибриноген-тромбинового клея и костной стружки, полученной во время операционного доступа.