ИСТИНА

Целью работы являлось создание модели нейросетчатки in vitro на базе органотипической эксплантационной культуры, пригодной для исследования распределения и дифференцировки различных типов клеток после их трансплантации и для оценки возможности функционального восстановления сетчатки при ее патологических изменениях. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи: 1) Получить долгосрочно-переживающие культуры нейросетчатки глаза крыс и показать их эквивалентность сетчатке in vivo. 2) Продемонстрировать адекватность полученной модели на примере исследования реакций эксплантатов сетчатки на трофические факторы (BDNF, PEDF, эритропоэтин, ангиопоэтин) и препараты (АвастинTM, Церебролизин). 3) Получить культуры EGFP+ клеток (ММСК, НСПК, ПЭ) мышей линии С57BL/6-Tg(ACTB-EGFP)/Osb/J и провести их трансплантацию in vitro в интактные эксплантаты сетчатки с последующей оценкой миграции, распределения, и дифференцировки трансплантированных клеток на различных сроках после инъекции. 4) Разработать систему контролируемого лазерного повреждения сетчатки in vitro и оценить его влияние на поведение трансплантированных НСПК и ММСК, на основе чего провести оптимизацию способов трансплантации клеточного материала в поврежденную сетчатку глаза с целью наиболее эффективной репарации дефектов. 5) Исследовать процессы восстановления поврежденной нейросетчатки на функциональном уровне с применением НСПК и ММСК, оценить возможность функциональной интеграции трансплантированных клеток в поврежденную сетчатку глаза. Основные положения, выносимые на защиту 1. Органотипическая культура сетчатки является адекватной моделью развивающейся нейросетчатки глаза, сохраняет свой клеточный состав и гистологическую организацию клеток, реагирует на экзогенные факторы роста и дифференцировки аналогично сетчатке in vivo. 2. Место и способ трансплантации обуславливают распределение трансплантированных НСПК, ММСК и клеток ПЭ в сетчатке, организацию их в ассоциаты и дальнейшую дифференцировку. В отсутствии повреждения эксплантата основные изменения миграционной активности инъецированных клеток происходят в первые часы после введения, а сама миграция завершается к 3-м суткам после инъекции. 3. Повреждение сетчатки лазером стимулирует миграционную активность трансплантированных клеток (до 14 суток после инъекции), обладая мощным аттрагирующим эффектом, ускоряет их дифференцировку, приводит к морфологическому преобразованию ММСК в нейроноподобные клетки. Инъекция клеток в слои нейросетчатки или нанесение их на ее фоторецепторную поверхность (при моделировании протоколов, используемых в клинике) имеет принципиальное значение для реализации терапевтического действия трансплантированных клеток. Работа была поддержана ФЦП “Научные и научно-педагогические кадры инновационной России” на 2009-2013г. Проведение поисковых НИР по направлению “Клеточные технологии” в рамках мероприятия 1.3.2 “Проведение научных исследований целевыми аспирантами” (“Исследование дифференцировки стволовых клеток из различных источников при их трансплантации в нейросетчатку глаза на модели 3D органотипического культивирования сетчатки крысы”, Госконтракт №П113 от 12 апреля 2010г.)