ИСТИНА

Актуальность проблемы. В настоящее время потребности пищевой индустрии в сырье и пищевых добавках как технологического, так и функционального действия в значительной степени решаются за счет импортных поставок. Среди пищевых добавок определенную нишу занимают ингредиенты -продукты микробного синтеза. К их числу относятся широко используемые в пищевой промышленности лимонная кислота и ферменты амилолитического действия. Однако объемы производства в РФ этих ингредиентов, необходимых целому ряду отраслей (кондитерская, спиртовая, крахмалопаточная и др.), ниже существующих потребностей: по лимонной кислоте почти в три раза, по амилолитическим ферментам - в два раза. В основу научного решения проблемы создания многоцелевого процесса положена концепция системного анализа нетрадиционных источников сырья с целью экологизации микробиологического производства за счет перехода на экологически чистое сырье - гидролизаты крахмалов, а также комплексного подхода к регуляции биосинтеза целевых продуктов и создания инновационных технологий ингредиентов, востребованных на российском рынке. Цель работы - разработка научных основ и создание новых экологически безопасных технологий пищевых ингредиентов и добавок, содержащих продукты метаболизма микроорганизмов различных таксономических групп, при ферментации крахмалсодержащего сырья. В задачи исследований входило проведение комплексных исследований, направленных на обоснование возможности получения с использованием гидролизатов крахмала в едином технологическом процессе нескольких целевых продуктов - лимонной кислоты и амилаз, а также ингибиторов гликозидаз. Основные положения, выносимые на защиту: Закономерности биодеструкции гидролизатов крахмала микроорганизмами различных таксономических групп для разработки «совмещенной» технологии лимонной кислоты и амилаз и технологии ингибиторов гликозидаз. • Критерии оценки направленности биосинтеза и пути его регуляции при биоконверсии продуктов деструкции крахмала продуцентом лимонной кислоты -микромицетом Aspergillus niger, сформулированные на основе характеристик кинетики и метаболизма синтезируемых им ключевых амилолитических ферментов (а-амилаза и глюкоамилаза) углеводного обмена. • Особенности биосинтеза ингибиторов гликозидаз при ферментации гидролизатов крахмалов штаммами аспергиллов и актиномицетов; свойства ингибиторов. ■ Обоснование компонентного состава рецептур комплексных пищевых добавок, содержащих кислотостабильные гидролазы и ингибиторы гликозидаз, полифункционального назначения и функционального действия. • Методология получения пищевых ингредиентов и добавок на основе продуктов биоконверсии деструктурированного крахмал содержащего сырья для расширения ассортимента и повышения рентабельности монопроизводства. Практическая значимость. На основании материалов исследований разработаны: • принципиально новые конкурентоспособные на мировом рынке технологии лимонной кислоты и амилаз и комплексной пищевой добавки Глюкоамилонигрин (ТИ 085-00334557-2004, ТИ 091-0034557-2005, ТИ 0920034557-2005); • инновационные технологии ингибиторов гликозидаз и комплексных пищевых добавок функционального назначения на их основе (ТИ 115-003345572008); • модифицированный метод определения глюкоамилазной активности в культуральной жидкости, ферментных препаратах и пищевых добавках; утверждены: • техническая документация на ферментный препарат Глюкоамилонигрин в жидкой и порошкообразной формах (ТУ 9199-002-00334557-04). Получено Санитарно-эпидемиологическое заключение ФГУЗ «Информационно-методический центр «Экспертиза» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека о возможности использования Глюкоамилонигрина в пищевой промышленности (№ 77.99.24.919.Т.001.091.06.05. от 20.06.2005); • два вида новой продукции - добавки пищевые функционального назначения для продуктов профилактического направления Люцентин (РЦ 234002-00334557-08) и Виолацентин (РЦ 235-002-00334557-08) и соответствующая разработанная техническая документация (ТУ 9199-080-00334557-08, ТУ 9199-081-00334557-08); • методические указания по применению препарата Глюкоамилонигрин в пищевой промышленности (РД 059-00334557-2004) и методические рекомендации по применению ингибитора гликозидаз в пищевых продуктах (РД 092-00334557-2008); проведены с положительным результатом опытно-промышленные испытания улучшителя на основе ферментного препарата Глюкоамилонигрин в хлебопекарном производстве и приготовлении пива; препарат ингибитора гликозидаз и комплексные пищевые добавки на его основе испытаны при приготовлении хлеба различных сортов; • методические указания для оценки содержания конидий продуцента в воздухе рабочей зоны при получении лимонной кислоты в лабораторных или производственных условиях с использованием различных видов сырья, в том числе и крахмалсодержащего: МУК 4.2.2656-10. «Метод микробиологического измерения концентрации клеток штамма-продуцента лимонной кислоты Aspergillus niger ВКПМ F-171 в воздухе рабочей зоны» (2010); • требования к качеству гидролизатов крахмалов как к сырью для промышленного производства лимонной кислоты (ГОСТ Р 52672-2006. «Гидролизаты крахмала. Общие технические условия»). Методология подготовки крахмалов к ферментации использована для разработки новых технологий лимонной кислоты на базе зернового крахмалсодержащего сырья. Выводы Разработана научная концепция получения в одном производственном цикле из крахмалсодержащего сырья и при использовании в качестве продуцентов микроорганизмов различных таксономических групп нескольких продуктов микробного синтеза (органических кислот, ферментов и их ингибиторов) для применения в пищевой промышленности в качестве ингредиентов и добавок полифункционалыюго назначения (в том числе комплексных), соответствующих нормативным требованиям безопасности. 1. Теоретически обоснованы и экспериментально подтверждены технологические режимы биокатализа крахмалсодержащего сырья, которые позволяют повысить доступность субстратов для продуцентов лимонной кислоты, амилолитических ферментов и ингибиторов. 2. Установлены закономерности биосинтеза лимонной кислоты при ферментации гидролизатов крахмалов. Показана возможность использования штаммов-кислотообразователей микромицета Aspergillus niger в качестве промышленных продуцентов амилаз и оптимизированы биотехнологические процессы получения продуктов микробного синтеза. 3. Селекционированы штаммы актиномицетов Streptomyces lucensis ВКПМ Ас-1743 и Streptomyces violaceus ВКПМ Ас-1734 - продуценты ингибиторов гликозидаз широкого спектра действия. Установлены закономерности биосинтеза ингибиторов актиномицетами и штаммами-кислотообразователями при ферментации гидролизатов крахмалов, на основе которых определены функции целевых метаболитов в биотехнологическом процессе: индуцибельные амилазы катализируют гидролиз углеводов питательной среды, а ингибиторы, образующиеся при лимитировании концентрации источника углерода, подавляют их активность для регулирования интенсивности гидролиза. Штаммы актиномицетов запатентованы (2 патента). 4. Установлено, что регуляция направленности биосинтеза при ферментации гидролизатов крахмалов как аспергиллами-кислотообразователями, так и актиномицетами возможна путем оптимизации состава питательной среды по содержанию моно-, ди и олигосахаридов и источников азота. Методом математического планирования при постановке полного многофакторного эксперимента показано, что в сбалансированном составе питательных сред основное влияние на биосинтез лимонной кислоты оказывают концентрация глюкозы, ферментов - концентрация мальтозы и отношение C:N, ингибиторов гликозидаз — концентрации глюкозы и соевой муки. Для биосинтеза ингибитора амилаз стрептомицетами предпочтительными являются продукты гидролиза кукурузного крахмала в составе гидролизатов с ДЕ, близким к значению, полученному для биосинтеза лимонной кислоты и амилаз. Разработаны технологии ферментации гидролизатов крахмалов аспергиллами-кислотообразователями и штаммами стрептомицетов, обеспечивающие продуктивность процесса соответственно по ферментам и ингибиторам, превышающую показатели действующих технологий в 3-5 раз (5 патентов). 5. Теоретически обоснован и экспериментально подтвержден механизм биосинтеза-секреции а-амилазы и глюкоамилазы продуцентом лимонной кислоты Aspergillus niger при ферментации гидролизатов крахмала. Динамика уровня активностей амилаз и цитратсинтазы (регуляторный фермент ЦТК на стадии биосинтеза лимонной кислоты) имеет фазный характер. 6. Установлено, что внутриклеточные и секреторные амилазы штамма F-171 Aspergillus niger - это самостоятельные белки, которые различаются строением, кинетическими и обменными параметрами, и представлены двумя изоэнзимами, внутри- и внеклеточные формы которых имеют близкие значения М.м.: • уровни константы Михаэлиса и максимальной скорости реакции гидролиза крахмала для секреторных амилаз выше, чем для внутриклеточных соответственно на два порядка и в 2,2 раза для а-амилазы, в 5 раз для глюкоамилазы; • время полуобновления и скорость распада внеклеточной а-амилазы в 3,3 раза, а глюкоамилазы соответственно в 4,5 и 4,8 раза меньше, чем у внутриклеточных ферментов. Содержание внеклеточной а-амилазы и глюкоамилазы в 2,4 раза ниже, чем их внутриклеточный уровень, что позволяет высказать предположение о большей востребованности ферментов во внутриклеточном углеводном обмене для обеспечения клетки продуцента продуктами гидролиза транзитных внеклеточных олигосахаридов. По отношению к общему белку а-амилаза составляет 22,2 %, а глюкоамилаза - 6,2 %, что свидетельствует об активной индукции синтеза а-амилазы продуктами гидролиза крахмала. 7. Доказано, что полученные препараты кислотостабильных амилаз обладают каталитическими свойствами на уровне ферментов в составах известных мультиэнзимных композиций, в том числе и импортных (3 патента). Разработаны рекомендации по их применению в качестве биокатализаторов при подготовке растительного сырья к биотехнологическому процессу, в процессах брожения при производстве хлеба и пива, в производстве модифицированного крахмала, глюкозных сиропов, в биохимии и медицине. Разработан состав комплексной пищевой добавки Глюкоамилонигрин, содержащий амилазы и лимонную кислоту, для интенсификации процессов брожения и улучшения свойств готовой продукции в пивоварении и хлебопечении (2 патента). 8. Установлена принадлежность ингибиторов, синтезируемых микромицетом-кислотообразователем Aspergillus niger и штаммами стрептомицетов при биоконверсии гидролизатов крахмала, к группе псевдосахаридов, существенно различающихся сродством к гликозидазам. Доказано, что ингибиторы, продуцируемые актиномицетами, в отличие от ингибиторов, синтезируемых аспергиллами-кислотообразователями, являются потенциальными гипогликемическими средствами. 9. Разработаны составы комплексных пищевых добавок Люцентин и Виолацентин, обеспечивающие снижение гликемического индекса готовой хлебобулочной продукции по сравнению с традиционными изделиями при сохранении соответствия физико-химических и органолептических показателей действующей нормативной документации. Показана возможность расширения ассортимента функциональных продуктов антидиабетического направления, в том числе и хлебобулочных изделий, приготовленных по рецептурам хлеба пшеничных сортов. Выпуск такой продукции имеет социальный эффект. 10. Разработана нормативная документация на сырье - гидролизаты крахмала (ГОСТ Р 52672-2006 «Гидролизаты крахмала. Общие технические условия») и техническая документация на новые технологии, апробированные на полупромышленных установках: 1. «совмещенная» (лимонная кислота и амилолитические ферменты); 2. технология ингибиторов гликозидаз. Технологии позволяют за счет использования крахмалов и практически безотходного мембранного способа выделения и очистки целевых веществ в условиях одного промышленного предприятия по производству лимонной кислоты дополнительно получать пищевые добавки, в том числе комплексные, специального и функционального (антидиабетического) назначения с физико-химическими и биохимическими показателями, отвечающими современным требованиям. Годовой экономический эффект от реализации технологий, обеспечивающих многоцелевой процесс получения пищевых ингредиентов и полифункциональных пищевых добавок в производстве лимонной кислоты, составит от 37 до 120 тыс. руб/(т готовой продукции). Основное содержание диссертации изложено в следующих работах: Монографии 1. Шарова, НЛО. Биосинтез и выделение лимонной кислоты и амилолитических ферментов/ Д.Х. Кулев, Н.Ю. Шарова- М.: ДеЛи принт, 2008. - 128 с. 2. Шарова НЛО. Процессы получения пищевых кислот и амилолитических ферментов/ Н.Ю. Шарова/ Теоретические основы пищевых технологий/ отв. редактор В.А. Панфилов. - М.: КолосС, 2009, Книга 2. - 608 с. Статьи, опубликованные в изданиях, рекомендованных ВАК РФ 3. Акулова (Шарова), Н.Ю. Инактивация глюкозидаз под действием биологически активного вещества из Actinoplanes sp./ Н.Ю. Акулова (Шарова), Е.В. Аверьянова, М.Д. Большакова, А.А. Селезнева // Прикладная биохимия и микробиология. - 1992. - т. 28, № 3. - С. 375-379. 4. Акулова (Шарова), Н.Ю. Сравнительное изучение действия ингибиторов микробного происхождения на различные а-глюкозидазы/ Н.Ю.Акулова (Шарова), Г.А. Казанина, А.А. Селезнева //Прикладная биохимия и микробиология. - 1994.- т.30, вып.1. - С.83- 87. 5. Акулова, (Шарова) Н.Ю. Микробные ингибиторы а-глюкозидаз псевдосахаридной природы. Обзор./ Н.Ю. Акулова (Шарова), А.А. Селезнева// Прикладная биохимия и микробиология. - 1995. - т. 31, № 4. - С. 371-380. 6. Шарова, Н.Ю. Новый ингибитор а-глюкозидаз из Streptomyces tomyces (Kitasatoa) sp./ Н.Ю. Шарова, А.А. Селезнева// Прикладная биохимия и микробиология. - 1999. - т. 35, № 1. - С. 10-14. 7. Шарова, Н.Ю. Роль экзогенных амилолитических ферментов Aspergillus niger при биосинтезе лимонной кислоты на гидролизате крахмала/ Т.А. Никифорова, Н.Ю. Брик, Л.Н. Мушникова, Н.Ю. Шарова, Т.В. Выборнова// Хранение и переработка сельхозсырья. - 1999. - № 9. - С. 17-18. 8. Шарова, Н.Ю. Очистка нативных растворов амилолитических ферментов/ Н.Ю. Шарова, Н.Н. Макагонова, Л.Н. Мушникова//Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 1999. - № 3. - С. 68-70. 9. Шарова, Н.Ю. Научные аспекты биоконверсии гидролизатов крахмала в лимонную кислоту/Н.Ю. Шарова, Л.Н. Мушникова, Т.А.Никифорова // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2001. - № 4. - С. 40-42. 10. Шарова, Н.Ю. Физико-химический и микробиологический состав углевод- улеводсодеращего сырья - субстрата для биосинтеза лимонной кислоты/ JT.H. Мушникова, Т.А. Никифорова, Т.А. Позднякова, Н.Ю. Шарова// Хранение и переработка сельхозсырья. - 2001. - №7. - С.7-9. 11. Шарова, Н.Ю. Выделение кислотостабильных амилолитических ферментов/ Н.Ю. Шарова, JI.H. Мушникова //Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2002. - № 4. - С. 80-81. 12. Шарова, Н.Ю. Ферментный препарат кислотостабильных амилаз -потенциальный улучшитель при приготовлении хлебобулочных изделий / Н.Ю. Шарова, Т.А. Никифорова, Л.И. Кузнецова, Н.Д. Синявская // Хлебопечение России,- 2003. -№ 2. - С. 26-28. 13. Шарова, Н.Ю. Углеводный состав пшеничной муки при гидролизе кислотостабильными амилазами/ Н.Ю. Шарова// Хранение и переработка сельхозсырья. - 2003. - № 5. - С.46-48. 14. Шарова, Н.Ю. Научные аспекты совмещенной технологии микробного синтеза/ Н.Ю. Шарова, Т.А. Никифорова// Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2004. - № 3. - С. 69-71. 15. Шарова, Н.Ю. Биокатализатор на основе кислотостабильного амилолитического комплекса микробного. происхождения/ Н.Ю. Шарова// Хранение и переработка сельхозсырья. - 2005. - № 2. - С. 27-29. 16. Шарова, Н.Ю. Влияние азотсодержащих компонентов питательной среды на биосинтез лимонной кислоты и кислотостабильных амилаз/ Н.Ю. Шарова//Хранение и переработка сельхозсырья. - 2005. - № 9. - С. 36-39. 17. Шарова, Н.Ю. Амилолитические ферменты гриба Aspergillus niger: выделение и свойства/ Н.Ю. Шарова, Т.А. Никифорова, А.В. Кабанов, В.П. Комов// Хранение и переработка сельхозсырья. - 2006. - № 3. - С. 42-44. 18. Шарова, Н.Ю. Секреция, выделение и характеристика а-амилазы плесневого гриба Aspergillus niger/ Н.Ю. Шарова, Т.А. Никифорова, В.П. Комов// Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2006. - № 1. - С. 80-82. 19. Шарова, Н.Ю. Биосинтез ингибиторов амилаз при биоконверсии гидролизатов крахмала штаммом актиномицета Streptomyces lucensis/ Н.Ю. Шарова, О.А. Ходкевич // Хранение и переработка сельхозсырья. - 2006. - № 11. - С. 43-45. 20. Шарова, Н.Ю. Модифициованный метод определения глюкоамилазной активности/ Н.Ю. Шарова//Хранение и переработка сельхозсырья. -2007. -№ 2,-С. 41-44. 21. Шарова, Н.Ю. Синтез и стабильность а-амилазы из плесневого гриба Aspergillus niger/ Н.Ю. Шарова, А.В. Кабанов, В.П. Комов// Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2007. - № 1. - С. 56-58. 22. Шарова, Н.Ю. Регуляция направленности биосинтеза лимонной кислоты при биоконверсии гидролизатов крахмала плесневым грибом Aspergillus niger/Н.Ю. Шарова, Т.А. Никифорова //Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2007. - № 6. - С. 19-21. 23. Шарова, Н.Ю. Закономерности биотрансформации гидролизатов крахмала штаммами актиномицетов - продуцентами ингибиторов амилаз/ Н.Ю. Шарова, О.А. Ходкевич // Хранение и переработка сельхозсырья. - 2007. - № 4. - С. 27-30. 24. Шарова, Н.Ю. Биосинтетическая способность штаммов гриба-кислотообразователя Aspergillus niger при ферментации крахмалсодержащего сырья/ Н.Ю. Шарова, Т.В. Выборнова, Т.А. Позднякова // Хранение и переработка сельхозсырья. - 2008. - № 1. - С. 52-54. 25. Шарова, Н.Ю. Влияние углеводных субстратов на биосинтез ингибитора гликозидаз/ Н.Ю. Шарова, Т.А. Никифорова, О.А. Ходкевич // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2008. - № 1. - С. 89-91. 26. Шарова, Н.Ю. Биосинтез ингибиторов гликозидаз актиномицетами рода Streptomyces/ Н.Ю. Шарова, О.А. Ходкевич // Хранение и переработка сельхозсырья,- 2008. - № 3. - С. 53-56. 27. Шарова, Н.Ю. Новые комплексные пищевые добавки для создания хлебобулочных изделий с низким гликемическим индексом / Н.Ю. Шарова, Т.А. Никифорова, О.А. Ходкевич, Л.И. Кузнецова, Е.С. Иванова // Хлебопродукты.-2008.-№ 11.-С. 57-59. 28. Шарова, Н.Ю. Теоретические аспекты синтеза а-амилазы мицелиальным грибом-кислотообразователем Aspergillus niger/ Н.Ю. Шарова, Т.А. Никифорова, А.В. Кабанов, В.П. Комов // Хранение и переработка сельхозсырья,- 2008. - № 8. -С. 59-61. 29. Шарова, Н.Ю. Крахмалсодержащие продукты переработки зерна ржи -перспективное сырье для биосинтеза лимонной кислоты/ Т.А. Позднякова, Н.Ю. Шарова, Т.В. Выборнова //Хранение и переработка сельхозсырья.- 2008.-№ 7.-С.56-59. 30. Шарова, Н.Ю. Выделение и свойства ингибитора гликозидаз псевдосахаридной природы/ Н.Ю. Шарова, О.А. Ходкевич// Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2009. - № 1. - С. 65-67. 31. Шарова, Н.Ю. Культурально-морфологические и физиолого-биохимические свойства новых штаммов актиномицетов — продуцентов ингибиторов гликозидаз/ Н.Ю. Шарова, О.А. Ходкевич, Т.А. Позднякова// Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2009. -№ 3. - С. 74-76. 32. Шарова, Н.Ю. Ингибитор гликозидаз - ингредиент для создания функциональных хлебобулочных изделий антидиабетического направления/ Н.Ю.Шарова, Т.А. Никифорова, О.А. Ходкевич, Л.И. Кузнецова, Е.С. Иванова// Хранение и переработка сельхозсырья. - 2010. - № 6. - С. 49-51. 33. Шарова, Н.Ю. Экологически безопасное сырье для микробиологического производства лимонной кислоты/ Н.Ю. Шарова// Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2011. - № 2. - С. 75-77. 34. Шарова, Н.Ю. Синтез и стабильность глюкоамилазы мицелиального гриба Aspergillus niger/ НЛО. Шарова, Т.А. Никифорова, А.В. Кабанов, В.П. Комов // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2011. - № 3. - С. 76-77. 35. Шарова, Н.Ю. Новые ферментные препараты для подготовки деструктурированного зерна ржи к ферментации в лимонную кислоту/ Н.Ю. Шарова, Н.В. Каменькова, О.А. Ходкевич // Хранение и переработка сельхозсырья. -2012. - № 6. - С. 37-39. Зарубежные публикации 36. Шарова, Н.Ю. Технология ингибитора гликозидаз- ингредиента для пищевых продуктов функционального назначения/ Н.Ю. Шарова, Т.А. Никифорова, О.А. Ходкевич // Материалы VII научно-практич. конф.: Инновационные технологии в пищевой промышленности. - Минск, 2008, ч. 2. -С. 202-208. 37. Шарова, Н.Ю. Новые технологии лимонной кислоты на основе крахмалсодержащего сырья/ Н.Ю. Шарова, Н.В. Каменькова, Т.В. Выборнова// Материалы VIII междунар. научно-практич. конф.: Инновационные технологии в пищевой промышленности. - Минск, 2009. - С. 46-53. 38. Шарова, Н.Ю. Направленный биосинтез ингибитора гликозидаз для лекарственной субстанции антидиабетического действия/ Н.Ю. Шарова// Материалы национального съезда фармацевтов Украины: Фармация Украины. Взгляд в будущее. - Харьков, 2010, Т. 1. - С. 565-566. Патенты на изобретения 39. Пат. 1816379 СССР Способ получения ингибитора а-глюкозидаз / Акулова (Шарова), Н.Ю., Большакова, М.Д., Аверьянова, Е.В., Селезнева, A.A. -ДСП.-заявл. 17.12.90. 40. Пат. 2186850 РФ Способ получения лимонной кислоты / Шарова, Н.Ю., Мушникова, Л.Н., Позднякова, Т.А., Никифорова, Т.А. Опубл. 10.08.2002, Бюл. 22. 41. Пат. 2215036 РФ Способ получения лимонной кислоты / Шарова, Н.Ю., Мушникова, Л.Н., Позднякова, Т.А., Никифорова, Т.А. Опубл. 27.10.2003, Бюл. 30. 42. Пат. 2233882 РФ Способ получения лимонной кислоты / Шарова, Н.Ю., Мушникова, Л.Н., Кулёв, Д.Х., Зенькевич, В.Б., Чиванов, В.Н., Старевский, A.B. Опубл. 10.08.2004, Бюл. 22. 43. Пат. 2261915 РФ Способ получения цитрата кальция / Шарова, Н.Ю., Мушникова, Л.Н. Опубл. 10.10.2005, Бюл. 28. 44. Пат. 2266960 РФ Способ получения лимонной кислоты, альфа-амилазы и глюкоамилазы / Шарова, Н.Ю., Никифорова, Т.А.. Опубл. 27.12.2005, Бюл. 36. 45. Пат. 2294368 РФ Пищевая добавка для гидролиза растительного сырья/ Шарова Н.Ю. Опубл. 27.02.2007, Бюл. № 6. 46. Пат. 2294371 РФ Способ получения лимонной кислоты и комплекса кислотостабильных амилолитических ферментов/ Шарова, Н.Ю. Опубл. 27.02.2007, Бюл. 6. 47. Пат. 2345529 РФ Способ производства хлеба и хлебобулочных изделий/ Евелева, В.В., Шарова, Н.Ю., Кузнецова, Л.И., Синявская, Н.Д. Опубл. 10.02.2009, Бюл. 4. 48. Пат. 2346042 РФ Штамм актиномицета Streptomyces violaceus -продуцент ингибитора гликозидаз / Шарова, Н.Ю., Никифорова, Т.А., Позднякова, Т.А. Опубл. 10.02.2009, Бюл. 4. 49. Пат. 2355755 РФ Штамм актиномицета Streptomyces lucensis -продуцент ингибитора гликозидаз / Шарова, Н.Ю., Позднякова, Т.А., Ходкевич, O.A. Опубл. 20.05.2009, Бюл. 14. 50. Пат. 2366712 РФ Способ получения лимонной кислоты, альфа-амилазы и глюкоамилазы / Шарова, Н.Ю., Позднякова, Т.А., Выборнова, Т.В., Кулев, Д.Х. Опубл. 10.09. 2009, Бюл. 25.