ИСТИНА

Целью работы являлась разработка подходов для получения, очистки и иммобилизации биологически активных белков на основе микробиологического синтеза и технологии аффинных доменов. В работы решены задачи клонирования в клетках Е. coli нуклеотидных последовательностей, кодирующих гены аффинных доменов: коллаген-связывающий домен из адгезина микроорганизма Staphylococcus aureus (SAu), коллаген-связывающие декапептиды из фактора фон Виллебранда быка (vWFB) и человека (vWFHl и vWFH2), коллаген-связывающий домен из остеонектина человека (CollBD), декстран-связывающий домен (DBD) из декстрансахаразы микроорганизма Leuconostoc mesenteroides subsp. Mesenteroides и гены биологически активных белков — цитокинов из организма человека: эпидермальный фактор роста (EGF), фактор роста фибробластов (FGF), интерферон бета (IFN-p) и костный морфогенетический белок человека 2 (ВМР-2). Проведен выбор оптимальных аффинных доменов для создания химерных конструкций с биологически активными белками. Проведена разработка штаммов Е. coli — продуцентов химерных рекомбинантных белков DBD-EGF, CollBD-FGF, DBD-IFN-p и CollBD-BMP-2. Осуществлена оптимизация условий культивирования штаммов-продуцентов химерных белков DBD-EGF, CollBD-FGF, DBD-IFN-P и CollBD-BMP-2. Проведена отработка методов очистки и иммобилизации химерных белков DBD-EGF, CollBD-FGF, DBD-IFN-p и CollBD-BMP-2 на соответствующих сорбентах - желатин-сефарозе для белков, несущих в своем составе коллаген-связывающий домен и Сефадексе для белков, содержащих декстран-связывающий домен. Проведена разработка методики оценки биологической активности препаратов химерных белков DBD-EGF и CollBD-FGF при культивировании эукариотических клеток in vitro. Проведено изучение биологической активности препарата белка DBD-IFN-p иммобилизованного на Сефадексе in vitro. Проведено изучение биологической активности препарата белка CollBD-BMP-2 in vitro. Разработаны методики изучения и проведена оценка биологической активности препаратов in vivo.