Анализ ингибирующего действия новых производных пурина и пиримидина на ферментативную активность обратной транскриптазы ВИЧ-1 методом гель-электрофорезакурсовая работа (Специалист)
Аннотация:Одним из самых опасных заболеваний конца XX – начала XXI века является синдром приобретенного иммунодефицита человека (СПИД), который вызывается вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). Без соответствующего лечения заболевание вызывают смерть пациента через 9—11 лет после заражения. На настоящий момент не существует лекарств, способных полностью излечить от СПИДа, тем не менее при проведении антиретровирусной терапии продолжительность жизни пациента может быть продлена на 20-30 лет. На сегодняшний день более 36 миллионов человек живут с ВИЧ, а в России число ВИЧ-инфицированных уже превысило 1 миллион человек. При этом темпы роста числа зараженных в России – одни из самых высоких в мире, что объясняется как быстро развивающейся резистентностью ВИЧ, так и низкой доступностью лечения в нашей стране. В связи с этим разработка новых анти-ВИЧ препаратов является особенно актуальной для Российской федерации.
Ранее в нашей лаборатории, а также нашими коллегами из Волгоградского государственного медицинского университета и Института молекулярной биологии имени В.А. Энгельгардта РАН были изучены производные урацила и цитозина в качестве ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы ВИЧ-1 [1]. В настоящей работе мы решили изучить ингибирующее действие на этот фермент 30 новых производных пурина и пиримидина, синтезированных в Волгоградском государственном медицинском университете. Для проверки активности веществ было изучено их влияние на реакции РНК-зависимой ДНК полимеризации и РНКазы Н, осуществляемые рекомбинантной обратной транскриптазой ВИЧ-1. В качестве субстратов реакций использовался РНК/ДНК гибридный олигонуклеотидный дуплекс, составленный из флуоресцентно-меченной 18-звенной РНК и радиоактивно-меченной 15-звенной ДНК. Анализ продуктов реакции производился в денатурирующем полиакриламидном геле. Наличие двух меток, позволяет в одной пробирке исследовать активность веществ одновременно в двух реакциях, катализируемых обратной транскриптазой ВИЧ-1. Для наиболее активных ингибиторов был определен параметр IC50, т.е. концентрация ингибитора, приводящая к уменьшению эффективности реакции на 50%.
Курсовая включает обзор литературы, посвященный методам исследования активности ингибиторов обратной транскриптазы in vitro.