Разработка способа определения G-квадруплексов в ДНК-системах, основанного на взаимодействии с белком MutS из системы репарации «мисматчей»курсовая работа (Бакалавр)
Аннотация:Богатые гуанином последовательности часто встречаются в геномах, и многие из них, как показано экспериментально, могут образовывать G-квадруплексы (G4 ДНК) в клеточных условиях. Наиболее распространены G4-мотивы в промоторных участках, сайтах переключения в генах иммуноглобулинов, «горячих точках» рекомбинации и теломерных участках. Биохимические исследования и опыты in vivo предполагают наличие у них регуляторной роли в таких важных клеточных процессах, как репликация, транскрипция, рекомбинация и защита хромосомных концов. Однако, помимо наличия регуляторных функций, G-квадруплексам приписывается роль в дестабилизации генома. Таким образом, G квадруплексы являются важной структурной формой организации ДНК, и их изучение в настоящее время является актуальной задачей.
Для in vitro и in vivo обнаружения и характеристики G-квадруплексов было разработано множество методов для исследований, в том числе биохимических. Например, известен ряд белков, способных узнавать и образовывать специфический комплекс с G4 ДНК. По некоторым данным к ним принадлежит белок MutS системы репарации неканонических пар нуклеотидов («мисматчей») в ДНК – MMR (от англ. Mismatch Repair) – важного механизма поддержания стабильности генома. Являясь одним из основных белков системы MMR, белок MutS, сканирующий ДНК и распознающий «мисматчи», связывает также другие неканонические структуры ДНК. Это свойство белка может быть применено для определения образования квадруплексных структур в достаточно протяженных фрагментах ДНК, где другие методы применять затруднительно.
Таким образом, целью работы было определение возможности использования взаимодействия белка MutS с ДНК для детектирования G-квадруплексов в определенных ДНК-системах на основании особенностей их взаимодействия. Основной задачей работы стало изучение характеристик связывания ДНК-лигандов, включая G-квадруплексы, с белком MutS из бактерий Escherichia coli (ecMutS) и Rhodobacter sphaeroides (rsMutS).