Аннотация:Было исследовано действие ионов Са на окисление ЦО-зой искусственного донора электронов ТМФД, а также на пероксидазную активность фермента с использованием в качестве субстрата реакции о-дианизидина. Показано, что скорость окисления ТМФД линейно зависит от концентрации субстрата в диапазоне 200 µМ - 1 мМ. При любой концентрации заметно, что присутствие ионов Ca2+ в растворе снижает скорость окисления ТМФД по сравнению с контрольными экспериментами, где в растворе содержалось только 100 µМ ЭГТА, который был необходим для связывания примесного кальция, чья концентрация могла достигать 30 µM. Среднее ингибирование ионами кальия составило 33%, что может показаться незначительной величиной, однако стоит учесть, что 10% от скорости реакции составляет самоокисление ТМФД, которое протекает самопроизвольно и не ингибируется цианидом. Ингибирования не наблюдалось c ионами Mg, а также если в среду предваритель добавляли 50 мМ натрия, конкурирующего с Са на место связывания с ЦО.
Кинетику окисления о-дианизидина изучали спектрофотометрически. Реакция запускалась добавлением перекиси водорода. Чтобы показать, что данная реакция действительно является пероксидазной и протекает под действием цитохромоксидазы, были проведены специальные контроли:: реакция не протекала без добавления H2O2, а также в присутствии цианида или без цитохромоксидазы.
Выводы. Полученные результаты позволяют утверждать, что ингибирующий эффект ионов кальция не специфичен для определенного субстрата окисления, а сохраняется при использовании искусственного донора электронов ТМФД со средним ингибированием 33%. Также ионы кальция способны ингибировать не только оксидазную, но и пероксидазную активность со средним ингибированием 24%.