Аннотация:Внутрисосудистое тромбообразование является причиной развития распространенных и опасных заболеваний, таких как: инфаркт миокарда, нестабильная стенокардия, ишемический инсульт и другие. Тромбин является ключевым ферментом в системе свертывания крови. Для лечения и профилактики тромбозов, применяются препараты, которые либо растворяют уже образовавшийся тромб, либо препятствуют процессу тромбообразования. По механизму действия все известные препараты разбиты на три группы: 1) тромболитики, 2) антиагреганты, 3) антикоагулянты. К последним относятся прямые ингибиторы тромбина, которые имеют свои достоинства и недостатки. В настоящее время существует объективная необходимость поиска новых препаратов - прямых ингибиторов тромбина.
Тромбин - многофункциональная сериновая протеиназа, которая гидролизует фибриноген до фибрина, который является основой тромба. Аптамеры - одноцепочечные ДНК или РНК олигонуклеотиды. Они ингибируют избыточную активность тромбина, специфически связываясь с белком.
Цель работы — изучить взаимодействие ДНК аптамеров различной структуры с тромбином. Были использованы ДНК аптамеры, имеющие различную длину двухтяжевого участка, а также в работе был использован комплементарный олигонуклеотид (антидот) к аптамеру, который мог разрушать комплекс аптамера с белком.
Были поставлены следующие задачи:
1. Рассмотреть взаимодействие ДНК аптамеров с тромбином;
2. Рассчитать кажущиеся константы диссоциации образовавшихся комплексов;
3. Изучить влияние антидота на взаимодействие аптамеров с тромбином.
Были получены следующие результаты.
С помощью электрофореза в полиакриламидном геле в неденатурирующих условиях было показано образование комплекса с выбранными аптамерами. Были рассчитаны кажущиеся константы диссоциации полученных комплексов. Было показано, что антидот разрушает комплекс аптамера с тромбином.