Использование системы бимолекулярной комплементации флуоресценции для оценки внутриклеточной локализации и взаимодействия белков в растительной клеткекурсовая работа (Специалист)
Аннотация:Непрерывная связь между клетками высших растений осуществляется через
плазмодесмы (ПД) - каналы, соединяющие клетки листа в единый симпласт. Из-за наличия непроницаемой клеточной стенки плазмодесмы для растений являются единственным путем для межклеточного транспорта. Проницаемость плазмодесм контролируется при помощи различных
факторов: отложений каллозы, полисахарида клеточной стенки, белков плазмодесм, а также белков, расположенных не в ПД, но влияющих на их пропускную способность. Однако плазмодесмы используются не только самими растениями, но и вирусами растений, перемещающимися по растению также через плазмодесмы и регулирующие их просвет, в том числе, при помощи своих транспортных белков (ТБ). Объектами данного исследования были два белка Nicotiana benthamiana: NbRGP1 и NbKPILP. Первый белок относится к семейству обратимо гликозилируемых полипептидов класса 1 (class 1 reversibly glycosylated
polypeptides). Вторым объектом исследования является NbKPILP - гомолог ингибитора
пептидазы Кунитца (Kunitz protease inhibitor-like protein), который индуцируется в ответ на стрессовые воздействия, в т.ч. вирусную инфекцию, а также увеличивает пропускную способность плазмодесм. При этом имеются данные, указывающие на то, что NbKPILP не является ПД белком.
Целью данной работы было изучения локализации NbKPILP и NbRGP1 с помощью системы бимолекулярной комплементации флуоресценции. В соответствии с целью были поставлены задачи:
1. Получить конструкции, кодирующие NbKPILP и NbRGP1, слитые с репортерными белками или их фрагментами
2. Получить конструкции, кодирующие маркеры плазмодесм и аппарата
Гольджи (АГ).
3. Экспрессировать гены изучаемых белков в Nicotiana benthamiana и
оценить локализацию изучаемых белков