Сравнительный анализ первичной структуры рибосомных межгенных спейсеров Puccinia graminis на разных стадиях жизненного цикла грибадипломная работа (Бакалавр)
Аннотация:При отработке вариантов клонирования PCR-продуктов IGS-1 спейсеров P.graminis с использованием наборов CloneJET и InsTAclone возникла проблема олигомеризации ПЦР-продуктов при клонировании, возможно связанная с рекомбинацией по найденным нами гомологичным повторяющимся участкам между вектором pJET1.2 и IGS-встройкой гриба. В результате анализ первичной структуры IGS-1спейсеров P.graminis проводился на клонированных с помощью набора InsTAclone PCR-продуктах.
На мажорных PCR-продуктах как весенней так и осенней дикариотичных (двуядерных) стадий P.graminis нами были обнаружены фрагменты флангов рибосомных генов гриба с межгенными участками, имеющими характерные регуляторные последовательности типа терминирующих транскрипцию повторов и сигналов полиаденилирования.
Исследованные минорные варианты представляли собой с рядом мобильных элементов, некоторых митохондриальных генов злаков.
При анализе первичной структуры минорных вариантов PCR-продуктов на дикариотичной покоящейся стадии P. graminis, образовавшейся к осени 2010 года, нами были обнаружены химерные молекулы, содержавшие короткие фрагменты флангов рибосомных генов гриба с праймирующимися последовательностями, и участки, имевшие гомологию с участками 4-х мобильных элементов (в т.ч. LTR транспозона Sukkula ячменя и интрона псевдогена транспозазы мобильного элемента Revolver-6 ржи), рекомбиназы А, белка rad 50, дрожжевого фактора сплайсинга SLU-7, а также митохондриальных NADH-дегидрогеназы и тРНК злаков. Кроме того, была найдена последовательность, гомологичная фрагменту белка теплового шока HSP70 гриба Rhizopus.
Нужно отметить, что в геноме пшеницы и других хлебных злаков, являющихся хозяевами ржавчинного гриба на бесполой дикариотичной стадии, анализировавшейся нами, известна рекомбинационная встройка митохондриальных генов, окруженная кластерами мобильных элементов и генов устойчивости к грибным фитопатогенам (например, Breen, 2009, 2010). В этом же участке генома есть гены белка-экспансина, экспрессирующиеся при осмотическом стрессе. Известно также, что тепловой шок приводит к активизации рекомбинационных перестроек генома, связанных с мобильными элементами.