|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Исследование взаимодействия флуоресцентного красителя тиофлавина Т с амилоидными фибриллами на основе альфа-синуклеинадипломная работа (Бакалавр)
- Научный руководитель: Сулацкая Анна Игоревна
- Автор: Волова Екатерина Андреевна
- Тип: Бакалавр
- Организация, в которой проходила защита: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургский государственный университет»
- Год защиты: 2013
- Аннотация: Для диагностики возникновения амилоидных фибрилл in vivo и in vitro уже долгое время эффективно используется бензтиазольный краситель тиофлавин Т (ThT). Это обусловлено высокой специфичностью взаимодействия ThT с амилоидными фибриллами. Краситель не взаимодействует с белками в нативном состоянии (за исключением ацетилхолинэстеразы и сывороточных альбуминов), с белками в развернутом и промежуточных частично-свернутых состояниях, а также с аморфными агрегатами белков. При взаимодействии с белками в состоянии амилоидных фибрилл, квантовый выход флуоресценции ThT возрастает в несколько тысяч раз, в то время как свободный краситель в водном растворе имеет очень низкий квантовый выход флуоресценции. В настоящее время стало очевидным, что тиофлавин Т можно использовать не только для диагностики возникновения амилоидных фибрилл, но и для изучения их структуры. В связи с этим важной задачей является определение параметров связывания ThT с амилоидными фибриллами. В литературе можно найти несколько десятков работ в которых эта задача решалась путем измерения зависимости интенсивности флуоресценции ThT от концентрации красителя в растворе. Однако сотрудниками нашей лаборатории был сделан очень существенный вывод о том, что этот широко используемый подход для определения параметров связывания ThT с амилоидными фибриллами, может быть использован только при корректном учете эффекта внутреннего фильтра (существование которого в большинстве работ вообще не учитывалось) и то, только в случае существования одной моды связывания. Для исследования взаимодействия ThT с амилоидными фибриллами был предложен новый универсальный подход, основанный на спектроскопическом исследовании раствора образца и раствора сравнения, полученных методом равновесного микродиализа. Сделано предположения, что параметры связывания красителя с амилоидными фибриллами, полученные с использованием данного подхода, могут быть использованы для сравнительного изучения структуры амилоидных фибрилл. Целью настоящей работы стало изучение структуры амилоидных фибрилл на основе альфа-синуклеина. С использованием электронной микроскопии и ряда спектроскопических методов получено подтверждение того, что альфа-синуклеин образует амилоидные фибриллы в ацетатном буфере (рН 3,7) в течение суток. Показано существование одной моды связывания тиофлавина Т с амилоидными фибриллами на основе α-синуклеина с константой связывания порядка 105 М-1 и стехиометрией 1:4. Параметры связывания тиофлавина Т с амилоидными фибриллами на основе α-синуклеина и с фибриллами на основе других амилоидогенных белков – инсулина, лизоцима и Аβ-пептида, существенно различаются. Этот факт свидетельствует о различии структуры амилоидных фибрилл, полученных на основе различных белков, и о возможности использования тиофлавина Т для ее изучения.
- Добавил в систему: Сулацкая Анна Игоревна