|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Трансляция мРНК ретротранспозона человека L1 in vitroдипломная работа (Специалист)
- Научный руководитель: Дмитриев С.Е.
- Автор: Быкова Наталия Викторовна
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2005
- Аннотация: Ретротранспозон L1 – чрезвычайно широко распространенный мобильный элемент, относящийся к группе LINE. Число его копий в геноме человека достигает 500000, что составляет 17% всей хромосомной ДНК. Около 100 L1-элементов до сих пор сохраняют свою активность, и их транспозиции являются причиной различных мутаций и наследственных заболеваний. Хотя процессы, связанные с транскрипцией и хромосомной интеграцией ретротранспозонов L1, изучены достаточно подробно, мало что известно о трансляции мРНК этих элементов. мРНК L1 уникальна тем, что является бицистронной матрицей, хотя большинство мРНК эукариот моноцистронны. Она кодирует два полипептида, необходимых для процесса ретротранспозиции: РНК-связывающий белок с неизвестной функцией (p40) и обратную транскриптазу. Работы, выполненные в группе Сингер и Сверголда (США), позволяют предположить, что оба белка синтезируются независимо, причём для инициации трансляции в обоих случаях используется необычный механизм, возможно, внутреннее связывание рибосомы. В отличие от ORF2p L1 – обратной транскриптазы, роль ORF1p (p40) в жизненном цикле L1 на данный момент не известна. Установлено, что p40 существует в форме мультимеров и образует РНП-частицы, связываясь с РНК L1 преимущественно in cis. p40 неспецифично взаимодействует с одноцепочечными РНК и ДНК, хуже с двуцепочечной ДНК; обладает свойствами ДНК-шаперона. Белок с такими свойствами может принимать участие в процессе интеграции L1-копии в геном, а также влиять на трансляцию первого и второго цистрона своей мРНК. Уникальная мРНК ретротранспозона L1 является крайне полезной моделью для исследования инициации трансляции на полицистронных мРНК эукариот, а установление роли p40 в трансляции мРНК L1 будет еще одним шагом в изучении функций РНК-связывающих белков. С другой стороны, данные исследования помогут установить механизмы регуляции жизненного цикла у важнейших мобильных элементов генома – ретротранспозонов L1. Целью данной дипломной работы было исследование механизма инициации трансляции первой рамки считывания мРНК L1, а также изучение влияния p40 на эффективность трансляции первой и второй рамок считывания этой мРНК. В работе сделаны следующие выводы: 1. Добавление экстракта клеток HeLa в систему трансляции на основе лизата ретикулоцитов кролика (RRL) приводит к исчезновению аберрантных продуктов трансляции ORF1 и уменьшению эффективности трансляции ORF2 мРНК L1. 2. Улучшение контекста стартового AUG-кодона второго цистрона мРНК L1 и удаление предшествующих ему AUG-кодонов приводит к увеличению эффективности трансляции ORF2 L1. 3. Инициация трансляции ORF1 мРНК L1 идет не по классическому сканирующему механизму, но и не является IRES-зависимой. 4. Инициация трансляции ORF1 и ORF2 мРНК L1 требует наличия активных факторов группы eIF4. 5. В системе RRL с добавлением экстракта клеток HeLa белок ORF1p (p40), выделенный из E.coli в денатурирующих условиях с последующей ренатурацией, подавляет трансляцию ORF2 и в меньшей степени ORF1 мРНК L1.
- Добавил в систему: Дмитриев Сергей Евгеньевич