Определение низкомолекулярных органических соединений флуориметрическим методом с использованием самосборных структур аналит – противоион – карбоцианиновый красительдипломная работа (Специалист)
Аннотация:В аналитической флуориметрии известны методы, основанные на явлении агрегации — образования супрамолекулярных структур за счет нековалентных взаимодействий. Такие методы основаны, в частности, на способности определяемого вещества изменять степень гидрофобности окружения флуоресцентного красителя, что изменяет квантовый выход его эмиссии.
В Лаборатории биоаналитических методов анализа было обнаружено, что гидрофобные карбоцианиновые красители способны образовывать флуоресцирующие агрегаты с молекулами крупных гидрофильных соединений, в частности, целого ряда лекарственных веществ, в присутствии поверхностно-активных веществ как противоионов. В своей работе мы продолжили исследование подобных флуориметрических систем и поиск путей их применения.
В первую очередь была поставлена задача расширить круг определяемых веществ, способных образовывать флуоресцирующие структуры [аналит — противоион — карбоцианиновый краситель]. Затем планировалось изучить возможность использования подобных тройных агрегатов для визуализации доставки одного из их компонентов в клетки. Для эффективной визуализации доставки требовалось выбрать биополимер, стабилизирующий тройные агрегаты, сохраняющий их флуоресценцию и позволяющий реализовать перенос получаемой капсулы через клеточную мембрану. Кроме того, необходимо было повысить устойчивость комплекса биополимера с агрегатом [аналит — противоион — карбоцианиновый краситель] за счет перехода к противоиону полимерной природы, что позволило бы также отказаться от использования токсичных ПАВ (додецилсульфата и цетилтриметиламмония), использованных в предыдущей работе.
ВЫВОДЫ
1) Обнаружено, что гидрофобные карбоцианиновые красители способны образовывать самосборные структуры с полигексаметиленгуанидином (ПГМГ) и цефтриаксоном или глицирризинатом натрия (далее – тройные агрегаты), что подтверждается разгоранием ИК-флуоресценции красителя в таких системах, а также методами динамического светорассеяния и Рэлеевского рассеяния. Выявлено, что наибольшая интенсивность флуоресцентного сигнала наблюдается при образовании агрегатов с красителем 1.
2) Построены зависимости интенсивности эмиссии от концентрации компонентов систем [краситель 1 – ПГМГ – цефтриаксон/глицирризинат]. Выбраны концентрации веществ, при которых наблюдается наибольший аналитический сигнал.
3) Показана возможность флуориметрического определения глицирризината в воде с использованием тройного агрегата [краситель 1 – ПГМГ – глицирризинат] в диапазоне концентраций 0,8-15,0 мкмоль/л. Предел обнаружения глицирризината в воде составил 0,6 мкмоль/л.
4) Продемонстрирована возможность определения цефтриаксона и ПГМГ в водном растворе флуориметрическим методом с пределами обнаружения 16 и 20 мкмоль/л, соответственно.
5) Изучена сорбция тройного агрегата [краситель 1 – ПГМГ – цефтриаксон] на разных сорбентах. Максимальный сигнал получен с использованием сорбента Диасорб-ИДК (кремнезем с привитыми иминодиацетатными группами). Показана возможность определения ПГМГ в речной воде (Яуза, Москва, Богатырский мост) флуориметрическим методом с предварительным концентрированием тройного агрегата на сорбенте Диасорб-ИДК в диапазоне концентраций 19-470 мкмоль/л. Предел обнаружения ПГМГ в речной воде составил 14 мкмоль/л.
6) Изучено влияние ряда полиэлектролитов на интенсивность сигнала флуоресценции в тройной системе [краситель 1 – ПГМГ – цефтриаксон] и выбран полимер для инкапсулирования тройного агрегата, который минимально влияет на интенсивность сигнала. Система, в которой в качестве полимера использовали малеинированный хитозан, предложена для визуализации доставки цефтриаксона как модельного лекарственного вещества в клетки рака молочной железы. С использованием метода конфокальной микроскопии зафиксирован флуоресцентный сигнал тройного агрегата в клетках.